TRAIL在重癥大皰型藥疹角質形成細胞凋亡中作用的研究.pdf

1、背景:角質形成細胞的凋亡是重癥大皰型藥疹（SBDE，包括SJS(史蒂文斯-約翰遜綜合征)和TEN（中毒性表皮壞死松解癥））早期關鍵事件。其免疫機制涉及CD8+T細胞、NK細胞、單核細胞等參與的細胞毒作用;而TN F-α、sFasL、granulysin（顆粒溶素）等細胞因子參與了凋亡作用的放大，現(xiàn)認為后者的作用可能更為重要。TRAIL（腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體）及其受體DR（死亡受體）4、DR5現(xiàn)認為是死亡受體相關凋亡中一條重要的通

2、路，但在本病中研究較少，對其深入研究有助于闡明重癥大皰型藥疹發(fā)病的免疫機制。
　　目的:從皮膚組織、皰液及外周血三個層面，研究角質形成細胞TRAIL及其受體的表達、皰液中細胞及外周血單個核細胞(PBMC) TRAIL的表達;分析sTRAIL(可溶性TRAIL)及本病中其他凋亡相關的細胞因子IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在皰液及外周血中的濃度;并在HaCaT細胞中參照上述細胞因子濃度研究其對sTRAIL誘導

3、角質形成細胞凋亡的影響，以期探索SBDE發(fā)病機制。
　　方法:1.免疫組化檢測SJS/TEN中的角質形成細胞TRAIL及DR4、DR5的表達。
　　2.Weste rn-Blot和RT-PCR檢測SJS/TEN患者皰液中細胞TRAIL的表達(蛋白和mRNA);用流式細胞儀分析皰液中細胞表型，并與TRAIL的表達進行相關性分析。
　　3.Western-Blot和RT-PCR檢測SJS/TEN患者PBMC中TRAIL的表

4、達，并與皰液中細胞比較。
　　4.ELISA檢測皰液中的細胞因子sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin濃度并與外周血比較。
　　5.培養(yǎng)HaCaT細胞。流式細胞儀An nexinⅤ-FITC/PI法檢測sTRAIL單獨及與IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin分別組合后的誘導HaCaT細胞凋亡作用，并進行比較。
　　6.通過細胞爬片及免疫組化，分析上述細胞因子對HaCa

5、T細胞TRAIL及DR4、DR5表達的影響。
　　結果:1.在20例SJS/TEN皮膚組織中發(fā)現(xiàn)角質形成細胞高表達TRAIL及DR4、DR5，并且在浸潤的炎癥細胞中也有表達，較10例發(fā)疹型藥疹對照有顯著差異。
　　2.在10例SJS/TEN皰液中細胞檢測到TRAIL的高表達（蛋白和mRNA），較9例對照（白癜風表皮移植患者供皮區(qū)大皰）有顯著差異，但表達有逐漸下降的趨勢;同時皰液中CD8+T細胞、NK細胞比例下降而CD14+細

6、胞增多，經(jīng)多重回歸分析發(fā)現(xiàn)TRAIL表達主要與CD8+T細胞有關。
　　3.在15例SJS/TEN PBMC檢測到TRAIL的表達低于皰液中細胞，但高于10例正常人及發(fā)疹型藥疹PBMC對照，且表達相對皰液中細胞穩(wěn)定。
　　4.sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在SJS/TEN皰液中濃度高于外周血濃度，后者也高于10例正常人及發(fā)疹型藥疹血清對照。但sTRAIL、IFN-γ、TNF-α濃度相對

7、穩(wěn)定而sFasL、granulysin濃度下降很快。
　　5.HaCaT細胞實驗發(fā)現(xiàn)sTRAIL單獨對HaCaT細胞凋亡作用弱。僅TNF-α在皰液中濃度情況下表現(xiàn)出較強的誘導凋亡作用。但IFN-γ、TNF-α與sTRAIL存在協(xié)同作用而sFasL、granulysin無相關性，IFN-γ表現(xiàn)更為明顯。
　　6.IFN-γ、TNF-α可上調HaCaT細胞TRAIL及DR4、DR5的表達，IFN-γ上調DR5表達的作用更明顯。<

8、br>　　結論:我們在SJS/TEN皮膚組織、皰液及外周血中均發(fā)現(xiàn)TRAIL的活化。PBMC中高表達TRAIL，血清sTRAIL的濃度也升高，意味著TRAIL也參與了本病的全身反應;而趨化至SJS/TEN皮膚組織的皰液細胞，尤其是早期的CD8+T細胞，TRAIL表達增強，可能通過直接結合或以高濃度的sTRAIL來誘導高表達DR4、DR5的角質形成細胞凋亡;角質形成細胞同時高表達TRAIL及DR4、DR5表明其在本病中不是單純的“受害者”