以生殖細(xì)胞為外源基因載體建立異種移植轉(zhuǎn)基因供體動(dòng)物的研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文以生殖細(xì)胞為外源基因載體建立異種移植轉(zhuǎn)基因供體動(dòng)物的研究姓名：楊惠祥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)泌尿外指導(dǎo)教師：徐勇王廣有20070501天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文對(duì)照組比較，三種轉(zhuǎn)基因小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞耐受人血清溶破的能力均有所增強(qiáng)。結(jié)論采用卵巢注射法可以使針對(duì)異種移植的基因在小鼠體內(nèi)整合，并可實(shí)現(xiàn)RNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，其整合與表達(dá)的效率要高于受精卵顯微注射法。三種轉(zhuǎn)基因構(gòu)件均可遺傳給后代(F1代)，并

2、在蛋白質(zhì)水平表達(dá)。人血清溶破實(shí)驗(yàn)證實(shí)，通過(guò)卵巢注射法制備的三種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以發(fā)揮抗異種排斥的作用。第二部分卵巢內(nèi)共注射建立hCD59／HT雙基因和hcD55／hcD59／HT三基因轉(zhuǎn)移小鼠的初步研究目的探討卵巢內(nèi)多基因共注射建立多基因轉(zhuǎn)移動(dòng)物的可行性。方法采用hCD59／HT雙基因重組質(zhì)粒和hCD59／hCD55／HT三基因重組質(zhì)粒共同注射卵巢的方法，得到原代小鼠。PCR和Southern印跡雜交法檢測(cè)原代小鼠目的基因整合，F(xiàn)CM檢測(cè)目

3、的基因表達(dá)。結(jié)果雙基因重組質(zhì)粒共同注射4只雌鼠，獲得Go代鼠31只。Southern印跡雜交證實(shí)僅出現(xiàn)hCD59／HT雙基因陽(yáng)性鼠2只，無(wú)單基因整合鼠，僅1只鼠出現(xiàn)hCD59／HT共表達(dá)陽(yáng)性，另1只鼠表達(dá)陰性。三基因重組質(zhì)粒共同注射5只雌鼠，3胎共產(chǎn)生Go代鼠137只，Southern印跡雜交證實(shí)僅出現(xiàn)hCD59／HT雙基因陽(yáng)性鼠2只，無(wú)其它整合情況，表達(dá)均為陰性。結(jié)論多基因共注射卵巢法可以得到相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，該方法確實(shí)可靠且周期較短

4、。但多基因共注射后，基因之間會(huì)互相影響，整合與表達(dá)的效率比單基因注射者明顯降低，提示其中有更復(fù)雜的機(jī)制參與，需要深入研究。第三部分‘PAMAM—D對(duì)hCD55基因轉(zhuǎn)染豬精子細(xì)胞介導(dǎo)作用的研究目的探討新型納米材料PAMAM—D對(duì)hOD55基因轉(zhuǎn)染豬精子細(xì)胞的介導(dǎo)作用。方法將新型納米材料PAMAMD(G5)和線狀hCD55DNA按照不同氮磷比(電荷比)制備PAMAM—D／hCD55復(fù)合物。取部分復(fù)合物酶切電泳。將復(fù)合物與處理后的l10e豬精