DAXX通過AR-SREBP-2信號(hào)通路下調(diào)HepG2細(xì)胞中膽固醇的合成.pdf

1、高膽固醇血癥是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和發(fā)展的危險(xiǎn)因子之一，雄激素受體作為膽固醇合成相關(guān)基因最重要的核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，被證實(shí)很可能通過與死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白相互結(jié)合而喪失轉(zhuǎn)錄激活功能，但其具體分子機(jī)制還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　目的：為了證實(shí)在HepG2細(xì)胞中DAXX可以與AR相互結(jié)合并抑制其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的膽固醇合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。
　　方法：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pCDNA3.1(+)/DAXX至體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞中，終濃度為1μmol/L的丙酸

2、睪酮處理DAXX過表達(dá)的HepG2細(xì)胞24 h，采用siRNA耗干擾竭內(nèi)源性DAXX，采用免疫共沉淀法檢測(cè)DAXX與AR的相互結(jié)合，應(yīng)用油紅O染色法、酶偶聯(lián)比色法和高效液相法檢測(cè)細(xì)胞中總膽固醇的含量，Western Blotting和RT-qPCR法檢測(cè)AR、SREBP-2和HMGCR的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：在HepG2細(xì)胞中 DAXX和 AR可以相互結(jié)合，但并不影響AR的轉(zhuǎn)錄表達(dá)；外源性DAXX過表達(dá)的HepG2細(xì)胞中總膽固醇的