Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-2在肝癌細(xì)胞化療耐藥中的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生率在所有腫瘤中排在第五位，而其死亡率則高居第三位。在中國，每年有超過500，000例的新增肝癌患者，其惡性程度高，預(yù)后差。多柔比星是一種臨床上常見的化療藥，然而，其對(duì)于肝細(xì)胞肝癌病人的客觀有效率卻不到20％，并且同其他化療藥物相比，單用多柔比星并未使病人的生存時(shí)間得到顯著延長(zhǎng)。造成這一現(xiàn)象的重要原因之一即是肝癌化療耐藥，而上皮間質(zhì)化可能是到這這一現(xiàn)象的的重要原因之一。Runx2又稱為cbfα1或AM

2、L3，是參與調(diào)控成骨細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，近來很多研究均報(bào)道Runx2同骨肉瘤、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌以及甲狀腺癌等惡性腫瘤發(fā)生及化療耐藥相關(guān)。雖然目前尚無在肝癌中的研究，但是在前列腺癌、乳腺癌和甲狀腺癌中已經(jīng)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)了Runx2的高表達(dá)可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)化，并且肝細(xì)胞肝癌因發(fā)生上皮間質(zhì)化而導(dǎo)致化療耐藥也已得到了大量的證實(shí)。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　研究Runx2在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其同化療耐藥

3、之間的關(guān)系，并在此基礎(chǔ)上探討同上皮間質(zhì)化機(jī)制關(guān)系。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　將2012年1月至2013年1月間在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院治療的62名肝癌患者作為研究對(duì)象，通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)標(biāo)本中Runx2表達(dá)水平。體外實(shí)驗(yàn)中以Hep3B、HepG2、Huh-7和SNU-449肝癌細(xì)胞系作為研究對(duì)象，通過細(xì)胞增殖檢測(cè)、Westernblotting和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)，結(jié)合siRNA干擾技術(shù)，檢測(cè)Runx2干擾前后各細(xì)胞系對(duì)于多柔比星

4、化療敏感性以及上皮間質(zhì)表型變化，從而探討其中機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　在62例肝癌患者腫瘤標(biāo)本中，Runx2陽性表達(dá)者占75.81％，有肝外轉(zhuǎn)移者中陽性和強(qiáng)陽性比例分別為33.87％和24.19％;化療耐藥者中陽性和強(qiáng)陽性比例分別為52.38％和38.10％;而對(duì)化療敏感者，Runx2檢測(cè)呈強(qiáng)陽性的僅9.38％，陽性和弱陽性者分別占25.00％和43.75％，而陰性者則有21.87％。體外研究發(fā)現(xiàn)，Runx2表達(dá)高的肝癌細(xì)

5、胞SNU-449對(duì)多柔比星耐藥，而Runx2表達(dá)最少的Hep3B細(xì)胞對(duì)多柔比星最為敏感，Runx2表達(dá)水平居中的HepG2和Huh-7細(xì)胞對(duì)多柔比星的化療敏感性也居中。當(dāng)Runx2表達(dá)受到抑制后，四個(gè)細(xì)胞系對(duì)多柔比星的化療敏感性均有不同程度的增加，且結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。進(jìn)一步研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Runx2表達(dá)高的SNU-449細(xì)胞為間質(zhì)表型，Runx2低表達(dá)的Hep3B細(xì)胞為上皮表型，而Runx2表達(dá)水平介于SNU-449和Hep3B之間的He

6、pG2和Huh-7細(xì)胞則兼具上皮表型和間質(zhì)表型特征。此外，我們還發(fā)現(xiàn)上皮表型的細(xì)胞對(duì)多柔比星化療敏感，而間質(zhì)表型的SNU-449細(xì)胞則表現(xiàn)出對(duì)多柔比星的耐藥。而當(dāng)間質(zhì)特性被減弱后，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性增強(qiáng)。而Runx2可以參與調(diào)控肝癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)化進(jìn)程，抑制Runx2的表達(dá)可以降低間質(zhì)特性、增強(qiáng)上皮特性，并且通過調(diào)控上皮間質(zhì)化從而進(jìn)一步調(diào)控腫瘤細(xì)胞對(duì)多柔比星的化療效果。
　　結(jié)論:
　　本研究證明了肝癌細(xì)胞中高表達(dá)的Ru