性別交叉骨髓、肝移植探討肝癌起源的動物實驗研究.pdf

1、本文旨在通過性別交叉骨髓移植、肝移植大鼠誘癌模型證明骨髓干細胞參與了肝癌的發(fā)生，并在此理論基礎上探討肝前體細胞(胚肝細胞)對大鼠肝癌的影響。 第一部分：通過骨髓移植建立雌雄嵌合體大鼠模型并DEN誘發(fā)肝癌。 通過性別交叉骨髓移植建立穩(wěn)定的雌雄嵌合體大鼠模型(雌性大鼠移植了雄性骨髓干細胞)，并利用PCR檢測Sry基因(性別決定基因，Y染色體標記)鑒定模型是否構建成功；然后將雌雄嵌合體大鼠飼喂DEN(二乙基亞硝胺)誘發(fā)肝癌。

2、 結果：通過性別交叉骨髓移植，成功建立了雌雄嵌合體大鼠模型，并通過PCR進行了證實，使追蹤骨髓干細胞成為可能；同時，經(jīng)過盡心的飼養(yǎng)與護理，獲得10例珍貴的雌雄嵌合體大鼠肝癌標本，為下一步的實驗打下了堅實基礎。 第二部分：通過肝移植建立雌雄嵌合體大鼠模型并DEN誘發(fā)肝癌。 通過性別交叉肝移植建立穩(wěn)定的雌雄嵌合體大鼠模型(雄性大鼠移植了雌性肝臟)，然后將雌雄嵌合體大鼠飼喂DEN(二乙基亞硝胺)誘發(fā)肝癌。 結果：

3、通過性別交叉肝移植，成功建立了雌雄嵌合體大鼠模型，經(jīng)過精心的飼養(yǎng)與護理，獲得4例珍貴的雌雄嵌合體大鼠肝癌標本，為下一步的實驗打下了堅實基礎。 第三部分：探討骨髓干細胞是否參與大鼠肝癌的發(fā)生。 探尋骨髓干細胞是否參與肝癌的發(fā)生。14只雌雄嵌合體大鼠肝癌標本(10只骨髓移植后，4只肝移植后)，首先通過H-E染色及免疫組織化學明確診斷為肝細胞癌；然后在分子水平證實肝癌組織含有雄性細胞——PeR檢測肝癌組織Sty基因(Y染色體特

4、異性標志)陽性，同時在形態(tài)學上證實肝癌組織含有雄性細胞——熒光原位雜交(FISH)檢測肝癌組織中存在Y染色體陽性細胞。通過對連續(xù)切片的病理結構及FISH結果比較分析，確定雌雄嵌合體肝癌組織存在Y染色體陽性肝癌細胞。以上這些結果表明：骨髓干細胞參與了肝癌的發(fā)生。 第四部分：探討胚肝細胞對大鼠原發(fā)性肝癌影響。 探討肝前體細胞(胚胎肝細胞)對于大鼠肝癌的影響。從目前的實驗結果來看，骨髓干細胞參與了大鼠肝癌的發(fā)生；同時，骨髓干細

5、胞是一種多能干細胞，分化成血液細胞、肝臟細胞、肌肉細胞、神經(jīng)細胞等。研究推測：骨髓干細胞遷移至肝臟后，首先分化為肝前體細胞，然后再分化為肝細胞和膽管上皮細胞，參與慢性肝損傷修復和肝癌發(fā)生。14天胚胎大鼠的肝臟內(nèi)含有大量肝前體細胞(胚肝細胞)，這些肝前體細胞對肝癌有什么影響呢?5只SD誘癌90天大鼠經(jīng)尾靜脈多次補充胚肝細胞，觀察大鼠的生存期及腫瘤生長情況；對照組為同批次5只誘癌大鼠。 結果：與對照組相比，處理組大鼠身體狀況差，生存