乳腺癌細(xì)胞中MKK7neddylation的鑒定與生物學(xué)意義研究.pdf

1、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal protein kinase，JNK)家族是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)超家族的重要成員之一，在多種胞外刺激下，JNK通過(guò)經(jīng)典的MAPK蛋白序列磷酸化模式被活化，即:MAPK激酶激酶（MAP3K或MEKK）磷酸化并活化MAPK激酶(MAP2K或MKK)，進(jìn)而MAP2K磷酸化并活化MAPK。JNK上游有兩個(gè)MAP2

2、K，MKK4和MKK7。MKK4不僅能夠激活JNK，還可以激活p38，而MKK7只特異地激活JNK。我們以往的工作提示，靶向MKK7可實(shí)現(xiàn)對(duì)JNK途徑特異、有效的調(diào)節(jié)。有報(bào)道表明，MKK7可發(fā)生泛素化修飾而降解，但其它“泛素樣蛋白”是否可通過(guò)修飾MKK7調(diào)節(jié)JNK活性還未見(jiàn)報(bào)道。
　　在“泛素樣蛋白”之中，NEDD8(neural precursor cell-expresseddevelopmentally downregula

3、ted8)的結(jié)構(gòu)與泛素最為接近，它與泛素具有80％的相似性，NEDD8特異地與底物共價(jià)結(jié)合的過(guò)程被稱為neddylation，其發(fā)生機(jī)制與泛素化相似，需要E1、E2、E3等酶介導(dǎo)的一系列酶促反應(yīng)，其中活化酶E1是由APPBP1(amyloid betaprecursor protein binding protein l)和UBA3(ubiquitin-like modifieractivating enzyme3)組成的異源二聚體。N

4、eddylation可以增強(qiáng)泛素連接酶活性，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程。研究表明neddylation在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要促進(jìn)作用，然而其分子機(jī)制尚不清楚。
　　本研究以乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MCF-7為主要研究模型，觀測(cè)了MKK7的neddylation情況，敲低UBA3/NEDD8對(duì)MAPK通路主要成分磷酸化的影響、對(duì)MKK7與JNK結(jié)合的影響、對(duì)MKK7激酶活性的影響，分析了MKK7和JNK在乳腺癌細(xì)胞惡性生長(zhǎng)中發(fā)揮

5、的作用，探討了MKK7 neddylation的可能生物學(xué)意義和E3，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在乳腺癌細(xì)胞中MKK7存在neddylation;SUMOylation E3 RanBP2(Ran-binding protein2)可能在MKK7neddylation中發(fā)揮重要作用;neddylation不影響MKK7被上游激酶磷酸化，但抑制MKK7的激酶活性，進(jìn)而導(dǎo)致JNK磷酸化水平下降。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌細(xì)胞中MKK7發(fā)揮促瘤作用，不存在