解耦聯(lián)蛋白2對顆粒細胞抗氧化能力及線粒體功能的影響研究.pdf

1、目的:卵泡顆粒細胞所提供的營養(yǎng)和信號是決定卵子能否正常生長和成熟的關鍵。人類卵泡顆粒細胞上存在著線粒體解耦聯(lián)蛋白2(UCP2)的表達。但UCP2在顆粒細胞中的具體作用尚末被充分闡釋。UCP2在顆粒細胞生長、增殖過程中到底發(fā)揮了何種作用？是否參與了卵母細胞生存環(huán)境的調(diào)節(jié)？本研究以原代培養(yǎng)的人類卵巢顆粒細胞為研究對象，通過引入UCP2特異性抑制劑京尼平，分析UCP2抑制對顆粒細胞氧化水平和抗氧化能力、線粒體膜電位強度、及培養(yǎng)液中甾體激素水平

2、的影響，探討UCP2在顆粒細胞中的作用，以及對和卵母細胞成熟、卵子發(fā)育的可能影響，從而為改善當前輔助生殖技術周期妊娠結(jié)局提供新思路。
　　 方法:以2011年10月～2012年10月在本生殖中心行常規(guī)IVF或ICSI的輸卵管因素不孕者卵丘卵母的顆粒細胞進行原代培養(yǎng)，加入UCP2蛋白抑制劑京尼平，用實時熒光定量PCR(FQ-PCR)和Western blot檢測和驗證顆粒細胞UCP2mRNA和UCP2蛋白水平，并通過分析顆粒細胞的

3、ROS水平、谷胱甘肽水平，線粒體膜電位水平，超氧化物歧化酶水平，以及培養(yǎng)液中E2、P激素水平的變化，以分析UCP2功能抑制對顆粒細胞的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、隨著京尼平濃度增加，顆粒細胞活力呈下降趨勢，在100μM時明顯低于對照組。
　　 2、京尼平呈濃度依賴性抑制UCP2蛋白表達，在20μM和50μM時明顯低于對照組;京尼平濃度20μM時，隨著作用時間的延長，蛋白水平表達呈下降趨勢，在24h和48h明顯

4、低于對照組;而mRNA水平并未隨著京尼平濃度的改變而發(fā)生明顯改變。
　　 3、顆粒細胞過氧化損傷隨京尼平濃度增加而增加，表現(xiàn)為細胞ROS水平呈上升趨勢，在50μM時明顯高于對照組;總谷胱甘肽和GSH含量呈下降趨勢但無顯著性差異，而GSH/GSSG比值呈下降趨勢并在50μM時明顯低于對照組;MnSOD活力呈增高趨勢，在50μM時明顯高于對照組。
　　 4、隨著京尼平濃度增加，UCP2蛋白表達下降，線粒體膜電位呈降低趨勢，在

5、20μM和50μM時明顯低于對照組。
　　 5、隨著京尼平濃度增加，顆粒細胞甾體激素雌二醇、孕酮分泌呈下降趨勢，孕酮水平在50μM時明顯低于對照組。
　　 結(jié)論:
　　 1、顆粒細胞UCP2表達和ROS生成呈負相關，即UCP2控制顆粒細胞過氧化水平，保護細胞抵抗氧化損傷，抗氧化反應增強。
　　 2、顆粒細胞UCP2表達影響線粒體相關功能，UCP2低表達時線粒體膜電位降低，UCP2的過低表達時預示細胞趨向早