楊梅果實EST文庫構(gòu)建.pdf

1、楊梅是我國特色果樹，果實風(fēng)味獨特，色澤鮮艷，汁液多，營養(yǎng)和藥用價值高，對人體有重要的醫(yī)療保健作用。為全面了解楊梅果實成熟與品質(zhì)形成機制，開展了楊梅果實EST研究，獲得了以下主要結(jié)果。 (1)構(gòu)建了楊梅果實四個成熟度cDNA文庫應(yīng)用改良Bugos法以綠色未成熟、轉(zhuǎn)色初熟、紅色成熟、暗紅色完熟“荸薺”楊梅果實為試材，提取總RNA，應(yīng)用polyAT技術(shù)分離純化mRNA，利用LD-PCR技術(shù)合成cDNA，經(jīng)Sfi I酶切后克隆入pDNR

2、-LIB載體，構(gòu)建了楊梅四個成熟度果實cDNA文庫。文庫滴度分別為1.18×106cfu／ml、3.92×105 cfu/ml、1.49x 105cfu/ml和2.01×105cfu/ml，文庫的重組率分別為94.74％、94.74％、100％和94.74％，插入片段長度在300 bp-1000 bp之間，表明文庫質(zhì)量較高。 (2)構(gòu)建了包含2000個克隆序列的EST文庫分別從四個cDNA文庫隨機挑取500個克隆進行測序，共獲得

3、2000個EST序列，分析表明，共有395個Unigene序列。將Unigene序列與Uniprot數(shù)據(jù)庫進行比對，具有同源序列的Ungene共315條，占Unigene總數(shù)的79.75％。將Unigene進行功能基因歸類，發(fā)現(xiàn)參與抗病、抗逆過程的防御性基因占總Unigene的14.18％，說明楊梅果實成熟期間抗逆防御體系運轉(zhuǎn)加強。鑒定出ACC氧化酶、多聚半乳糖醛酸酶等成熟相關(guān)基因以及類甜蛋白、MYB轉(zhuǎn)錄因子等果實品質(zhì)形成相關(guān)基因。