正常豬外周血淋巴細胞cDNA文庫的構(gòu)建和EST的初步分析.pdf

1、淋巴細胞是具有特異性免疫功能的免疫活性細胞，它們在免疫應答過程中起著核心作用，是構(gòu)成機體防御系統(tǒng)的重要組成部分。 本研究用經(jīng)典文庫構(gòu)建技術(shù)，構(gòu)建了正常豬外周血淋巴細胞cDNA文庫，得到了庫容量為1.2×106pfu/ml、重組率為94﹪、85﹪的插入片段處于750bp～2000之間的高質(zhì)量文庫。隨機測定了1100條ESTs，經(jīng)拼接和聚類，得到了152條高表達基因Contigs和619條低表達基因Singletons。其中高表達基

2、因主要包括：血色素α亞基、rRNA核酸內(nèi)切酶、衰老相關(guān)蛋白、促進增殖基因21、細胞色素氧化酶Ⅲ和血色素β亞基。經(jīng)序列比對后發(fā)現(xiàn)，有23﹪的ESTs為與任何物種都沒有匹配的新基因，有75.9﹪的ESTs為與豬沒有匹配的豬的新基因，說明了大部分的豬外周血淋巴細胞的基因還沒有被分離和鑒定出來。經(jīng)GO進行功能基因的分類和KEGG進行路徑圖的繪制，初步繪制了正常豬外周血淋巴細胞的基因表達譜。推測碳水化合物代謝、能量代謝、脂肪代謝、核苷代謝、氨基酸

3、代謝及輔因子和維生素代謝為豬外周血淋巴細胞主要的基礎(chǔ)代謝。細胞信號傳導路徑中MAPK信號通路、鈣信號通路、胰島素信號通路、脂肪細胞因子信號通路、免疫系統(tǒng)中的Toll樣受體信號通路、B細胞受體信號通路和T細胞受體信號通路在實現(xiàn)豬外周血淋巴細胞功能方面至關(guān)重要。 本研究構(gòu)建了高質(zhì)量的豬外周血淋巴細胞cDNA文庫，并繪制了正常豬外周血淋巴細胞基因表達譜，為研究免疫相關(guān)基因提供了平臺，為下一步做芯片雜交，進一步揭示病毒感染的致病機理奠定