乳化硅油小滴對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞吞噬、增生和移行的影響.pdf

1、目的 硅油目前廣泛用于治療復(fù)雜孔源性視網(wǎng)膜脫離，特別是增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（PVR）。但眼內(nèi)長(zhǎng)期放置硅油可引起許多并發(fā)癥，其中大多與硅油乳化有關(guān)。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)硅油乳化患者中有視網(wǎng)膜下膜的形成，視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE) 細(xì)胞也有增殖；乳化硅油可能刺激膜形成和PVR反應(yīng)，但詳細(xì)的研究報(bào)告不多。本實(shí)驗(yàn)的目的是: （1）利用膜乳化技術(shù)制備乳化硅油，為細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)提供適宜的乳化

2、硅油小滴； （2）觀察乳化硅油小滴及血清對(duì)人RPE細(xì)胞增生及移行活性的影響，以及RPE細(xì)胞對(duì)硅油小滴的吞噬情況。 方法: 1. 使用微孔膜，孔徑分別為0.2μm和0.45μm，在一定的壓強(qiáng)下使硅油通過(guò)微孔膜，分散于磷酸緩沖液(PBS)中，光學(xué)顯微鏡觀察硅油小滴大小，測(cè)定硅油小滴平均粒徑。 2. 吞噬實(shí)驗(yàn)：將制備的硅油小滴用酞箐藍(lán)標(biāo)記。加入人RPE細(xì)胞培養(yǎng)液中，伴或不伴有血清，孵育24 h。在顯微鏡下計(jì)數(shù)被

3、細(xì)胞內(nèi)吞的硅油小滴。 3. 嗜銀蛋白分析實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞與硅油小滴，伴或不伴有血清，共同孵育24h，進(jìn)行嗜銀蛋白分析，計(jì)數(shù)銀染顆粒數(shù)量，觀察硅油小滴及血清對(duì)RPE細(xì)胞增殖活性的影響。 4. 移行實(shí)驗(yàn)：應(yīng)用人RPE細(xì)胞爬片劃痕損傷模型，加入硅油小滴，伴或不伴有血清，共同孵育72h，計(jì)數(shù)進(jìn)入缺損區(qū)的細(xì)胞。 結(jié)果: 1. 在3 個(gè)大氣壓作用下，0.2μm 和0.45μm 微孔膜制得的硅油小滴粒徑分別為2

4、.33±0.618μm 和4.63±0.833μm。 2. 在1 個(gè)大氣壓下，用孔徑為0.45μm 的微孔膜制得的硅油小滴粒徑為4.25±0.77μm，酞箐藍(lán)可示蹤硅油小滴。RPE 細(xì)胞吞噬硅油小滴的數(shù)量有明顯劑量依賴(lài)性，隨乳化小滴濃度增高，吞噬數(shù)量也增加。乳化硅油小滴濃度為50.0mL/L 時(shí)，細(xì)胞內(nèi)吞平均數(shù)量為35.93±3.28 個(gè)；而加有100mL/L 新生牛血清組，則為40.27±4.34 個(gè)（P<0.05）。

5、 3. 硅油小滴對(duì)人RPE 細(xì)胞增殖活性有刺激作用。加入硅油小滴的人RPE細(xì)胞核內(nèi)核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色(AgNORs)顆粒的平均數(shù)量與對(duì)照組有顯著差異（P<0.01），但各硅油濃度間差異不顯著（P>0.1）。硅油濃度為12.5mL/L時(shí)，細(xì)胞核內(nèi)AgNORs 顆粒的平均數(shù)量為2.8±0.63 個(gè)，（對(duì)照，1.6±0.60 個(gè)；P<0.01）；在加有100mL/L 新生牛血清組則為4.3±0.92 個(gè)，（對(duì)照，2.3±0.65個(gè)；P<0

6、.01）。 4. 較高濃度硅油小滴可抑制人RPE 細(xì)胞的移行，且呈濃度依賴(lài)性。硅油小滴濃度為50.0mL/L 時(shí)，細(xì)胞平均移行數(shù)量為10.6±3.03 個(gè)，（對(duì)照，69.9±9.88 個(gè)；P<0.001）；加有100mL/L 新生牛血清時(shí)，則為13.2±3.79 個(gè)，（對(duì)照，91.0±12.99 個(gè)；P<0.001）。 結(jié)論: 1. 用微孔膜制得硅油小滴顆粒大小易控制，粒徑均勻。本實(shí)驗(yàn)證明用0.45μm 孔徑的微