瘦素對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞PEDF和TNF-α蛋白表達的影響.pdf

1、[目的]
　　探討在正常濃度葡萄糖、高糖和胰島素抵抗狀態(tài)下，不同濃度的瘦素(Leptin)對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞活性以及色素上皮細胞衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor，PEDF)和腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)表達的影響。
　　[方法]
　　體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(culturedhumanretinalpigmentepithel

2、ialcells-19，ARPE-19)，隨機分為正常濃度葡萄糖組（含葡萄糖5.6mmol/L）、高糖組（含葡萄糖30mmol/L）和胰島素抵抗組（30mmol/L葡萄糖+100nmol/L胰島素）;分別以濃度為10ng/mL、100ng/mL及1000ng/mL的瘦素(Leptin)干預(yù)12小時、24小時、48小時，用MTT法檢測細胞增殖情況;以濃度為10ng/mL、100ng/mL的瘦素(Leptin)分別干預(yù)12小時、24小時、4

3、8小時，用蛋白免疫印跡法(WesternBlot)檢測培養(yǎng)液及胞漿中PEDF、TNF-α的蛋白表達量。
　　[結(jié)果]
　　MTT法顯示:①以Leptin濃度為10ng/mL、100ng/mL分別干預(yù)ARPE-19細胞12小時、24小時、48小時后，各組Leptin吸光度值與空白對照組無明顯差異(P＞0.05);②當(dāng)Leptin干預(yù)濃度達到1000ng/mL時，分別作用12小時、24小時、48小時，各組吸光度值均低于空白對照組

4、(P＜0.01）。
　　蛋白免疫印跡法檢測顯示:①在所有觀察時間(12小時、24小時、48小時)，Leptin(10ng/mL、100ng/mL)干預(yù)的條件下:除正常濃度葡萄糖組12小時、Leptin濃度為10ng/mL時，RPE細胞培養(yǎng)液中分泌的PEDF蛋白表達量較空白組未見明顯增多外(P＞0.05)外，其余各組RPE細胞胞漿內(nèi)和培養(yǎng)液中PEDF蛋白的表達增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01);且各組RPE細胞胞

5、漿內(nèi)和培養(yǎng)液中PEDF蛋白的表達與Leptin呈濃度依賴性，隨Leptin濃度升高，RPE細胞胞漿內(nèi)和培養(yǎng)液中PEDF蛋白的表達增多。高糖組RPE細胞胞漿內(nèi)和培養(yǎng)液中PEDF蛋白的表達隨Leptin作用時間延長而逐漸減少(P＜0.05，P＜0.01)，其余兩組則隨時間延長而增加(P＜0.01)。②在所有觀察時間（12小時、24小時、48小時），Leptin(10ng/mL、100ng/mL)干預(yù)的條件下:正常濃度葡萄糖組、高糖組和胰島素

6、抵抗組人RPE細胞胞漿內(nèi)及培養(yǎng)液中TNF-α蛋白表達量均增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。正常濃度葡萄糖組RPE細胞胞漿內(nèi)和培養(yǎng)液中TNF-α蛋白的表達與Leptin呈現(xiàn)時間-濃度依賴性(P＜0.05，P＜0.01)，.....;高糖組RPE細胞培養(yǎng)液中TNF-α蛋白的表達與Leptin呈時間-濃度依賴性，但其胞漿內(nèi)的表達則隨時間延長出現(xiàn)先增加后減少的趨勢(P＜0.01);胰島素抵抗組，短時間低濃度Leptin能促

7、進RPE細胞培養(yǎng)液中TNF-α蛋白的表達，隨著Leptin濃度增加和作用時間延長，其表達量下降。③隨著Leptin干預(yù)濃度的升高和作用時間的延長，三組RPE細胞胞漿內(nèi)和培養(yǎng)液中PEDF和TNF-α的蛋白表達均較空白對照組高;12小時、24小時，胰島素抵抗組RPE細胞胞漿內(nèi)PEDF蛋白的表達高于高糖組，而此時高糖組RPE細胞培養(yǎng)液中PEDF蛋白的表達較胰島素組高;48小時，高糖組RPE細胞胞漿內(nèi)PEDF蛋白的表達較胰島素抵抗組高，兩組RP

8、E細胞培養(yǎng)液中PEDF蛋白的表達無顯著差異(P＞0.05)。而高濃度Leptin則明顯抑制胰島素抵抗組RPE細胞胞漿內(nèi)和培養(yǎng)液中TNF-α蛋白的表達(P＜0.05，P＜0.01)。
　　[結(jié)論]
　　瘦素能促進正常、高血糖、胰島素抵抗狀態(tài)下人視網(wǎng)膜色素上皮細胞合成和分泌PEDF、TNF-α蛋白;胰島素抵抗狀態(tài)下，瘦素促進人視網(wǎng)膜色素上皮細胞合成和分泌PEDF、TNF-α蛋白的量相對減少;瘦素、PEDF、TNF-α三者在胰島素