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文檔簡介
1、目的：利用RNA干擾技術(shù),封閉轉(zhuǎn)錄中介因子1-γ( transcriptional intermediary factor1γ, TIF1-γ)在腎小管上皮細(xì)胞(HKC)中的表達(dá),外源性的加入TGF-β或/及TGF-β受體酶抑制劑(SB431542),探討 TIF1-γ在轉(zhuǎn)化生長因子β( transforming growth factor-β,TGF-β)誘導(dǎo)的腎纖維化中的作用。
方法：構(gòu)建能表達(dá)針對TIF1-γ的小干擾RN
2、A(siRNA)的慢病毒載體,以及表達(dá)不針對任何已知mRNA的siRNA的陰性對照載體,分別感染人腎小管上皮細(xì)胞株(HKC),得到 TIF1-γ表達(dá)受抑制的HKC- siTIF1-γ和TIF1-γ表達(dá)未受影響的HKC-siControl。將培養(yǎng)的細(xì)胞分為3組:正常 HKC組,HKC-siTIF1-γ組及HKC-siControl組,然后加入外源性的TGF-β或/及SB431542,72h后,分別采用四唑鹽(MTT)比色法實驗和weste
3、rn blot檢測,并分析TIF1-γ在TGF-β抑制腎小管上皮細(xì)胞增殖效應(yīng)中的作用。
結(jié)果：沒有加入 TGF-β時,三組細(xì)胞生長活力差異不大,當(dāng)只加入 TGF-β,三組細(xì)胞生長活力均受到明顯抑制,同時加入 TGF-β及SB431542時,三組細(xì)胞生長活力略有抑制。并且正常HKC組和HKC-siControl組中TIF1-γ正常表達(dá), TGF-β抑制腎小管上皮細(xì)胞增殖的作用相當(dāng),但在HKC-siTIF1-γ組中TIF1-γ的表
4、達(dá)受到明顯抑制,幾乎不表達(dá)時,TGF-β抑制腎小管上皮細(xì)胞增殖的作用比正常HKC組和HKC-siControl組要強(qiáng)很多,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。換另一種方式來解釋就是,因為 TIF1-γ的表達(dá),腎小管上皮細(xì)胞對 TGF-β抑制增殖效應(yīng)的敏感性降低。TIF1-γ的表達(dá)和TGF-β抑制腎小管上皮細(xì)胞增殖效應(yīng)呈顯著負(fù)相關(guān)。
結(jié)論：TIF1-γ的表達(dá)明顯減低HKC對TGFβ抑制增殖效應(yīng)的敏感性,提示TIF1-γ在TGF-β誘導(dǎo)的腎纖維化
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