Rac1介導GGT對腦膠質瘤增殖和凋亡作用的研究.pdf

1、目的：探討GGT對膠質瘤細胞增殖和凋亡的影響及其機制。
　　方法：1、運用Western blot檢測非腫瘤腦組織及不同級別膠質瘤組織中GGT特異性β亞基的蛋白水平，分析其與腦膠質瘤發(fā)生的相關性。2、在U251細胞中用小干擾下調GGT-β表達后，分別用CCK8法及流式細胞術檢測GGT對細胞增殖與凋亡的影響。3、過表達GGT-β后用CCK8法檢測細胞增殖情況。4、用小干擾下調GGT-β后，分離細胞漿與細胞膜組份，應用Western

2、blot檢測小G蛋白Racl，RhoA的膜轉位情況；應用GST-pulldown檢測活性形式的Racl的水平變化，明確GGT對Racl，RhoA的調節(jié)作用。5、在U251細胞中過表達GGT底物Racl或RhoA后，檢測細胞增殖情況。6、GGT-β與Racl野生型及不能被GGT修飾的突變體質粒共轉后，檢測細胞增殖情況，明確GGT作用的機制。
　　結果：1、在人腦膠質瘤手術標本中，GGT-β水平明顯高于非腫瘤腦組織，差異有統(tǒng)計學意義(

3、P<0.01)。2、下調GGT-β表達48小時后，U251細胞增殖明顯受到抑制，凋亡增加；GGT特異性抑制劑(GGTi-2147)同樣抑制U251細胞的增殖。3、過表達GGT-β促進U251細胞增殖(P<0.05)。4、下調GGT-β表達后，細胞膜上Racl，RhoA的水平降低，活性形式的Racl水平減少(P<0.01)。5、U251細胞轉染Racl，RhoA后可以促進細胞增殖。6、共轉GGT-β與Racl野生型質粒后細胞增殖更加明顯，