結核分枝桿菌特異性重組抗原在結核病血清學診斷中的研究.pdf

1、目的:建立規(guī)范的結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)特異性抗原重組蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)檢測系統。用建立的檢測系統檢測結核病(tuberculosis,TB)患者血清，以確定MTB特異性抗原重組蛋白檢測的靈敏度和特異性，試圖提高結核病的臨床實驗室診斷水平。 方法:采用

2、方陣法和ROC(Receiver Operating Characteristic)曲線法確定MTB特異性抗原重組蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63酶聯免疫吸附試驗最佳抗原包被濃度和酶標二抗?jié)舛?，以ROC曲線法確定四種抗原蛋白ELISA法檢測的“陽性判斷”值(cut-off值)，建立起規(guī)范的ELISA檢測系統。用已建立的四種抗原蛋白ELISA檢測系統檢測臨床收集到的標本，以ROC曲線法確定四種抗原蛋白的靈敏度及特異性值。

3、對同一批血清標本進行結核抗體檢測。將四種重組特異性抗原聯合組與痰涂片組、結核抗體組的靈敏度及特異性值進行比較，并對組間差異進行統計學分析。 結果: 1．MTB特異性抗原重組蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63 ELISA檢測系統的抗原包被濃度和酶標二抗?jié)舛确謩e在1∶32000和1∶1000；1∶64000和1∶1000；1∶64000和1∶1000以及1∶128000和1∶1000時為最佳。 2．M

4、tb8.4、38KD、MPT64和MPT63四種特異性抗原檢測其各自相應的抗體，靈敏度和特異性分別是47.60﹪和93﹪、59.60﹪和92.30﹪、68.00﹪和92.30﹪以及70.41﹪和87.25﹪，特異性抗原聯合組檢測的靈敏度和特異性為82.4﹪和88.3﹪。痰涂片組和結核抗體組檢測結核病的靈敏度分別是42.2﹪和51.9﹪，結核抗體組特異性是81.8﹪。Mtb8.4蛋白與38KD蛋白和MPT63蛋白呈正的線性相關，MPT64

5、蛋白與38KD蛋白呈正的線性相關，四種抗原之間雖然存在一定的相關性，但是不能相互替代，四種抗原相互補充的方法檢測結核病的檢測效果最為理想。 3．特異性抗原聯合組與經典的抗酸染色法(痰涂片組)和目前臨床推廣使用的結核抗體檢測法(結核抗體組)相比，檢測結核病均顯示有統計學差異。特異性抗原聯合組檢測結核桿菌的靈敏度和特異性優(yōu)于目前臨床推廣使用的結核抗體檢測法(結核抗體組)。靈敏度顯著優(yōu)于經典的抗酸染色法(痰涂片組)。 4．結核

6、病病人的病程與Mtb8.4蛋白和38KD蛋白，呈正的線性相關。白細胞(粒細胞)與38KD蛋白，呈正的線性相關。血清白蛋白與38KD蛋白存在負的線性相關關系。 結論: 1．建立了MTB特異性蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63規(guī)范化的ELISA檢測系統。 2．用方陣法和ROC曲線獲得特異性抗原重組蛋白的最佳抗原包被濃度和酶標二抗?jié)舛?，是建立?guī)范化的EUSA檢測系統的關鍵環(huán)節(jié)。 3．四種抗原之間

7、雖然存在一定的相關性，但是不能相互替代，四種特異性抗原聯合相互補充的方法檢測結核病的檢測效果最為理想。特異性抗原聯合組無論與經典的抗酸染色法(痰涂片組)相比還是與目前臨床推廣使用的結核抗體檢測法(結核抗體組)相比，檢測結核病均顯示有統計學差異。特異性抗原聯合組檢測結核桿菌的靈敏度和特異性優(yōu)于目前臨床推廣使用的結核抗體檢測法(結核抗體組)。靈敏度顯著優(yōu)于經典的抗酸染色法(痰涂片組)。 4．Mtb8.4蛋白和38KD蛋白抗原相應的抗