肝硬化門脈高壓犬模型的舌下絡(luò)脈特征及其與VEGF表達(dá)的關(guān)系研究.pdf

1、[研究背景]舌下絡(luò)脈診是中醫(yī)舌診的重要組成部分，因其顯露易見、反應(yīng)靈敏，為臨床觀察人體氣血、津液盈虧和瘀血輕重的重要指征。我們在長期的原發(fā)性肝癌和肝硬化臨床研究中發(fā)現(xiàn)，上述患者多伴有舌下絡(luò)脈的擴(kuò)張、迂曲等形態(tài)及青紫、絳紫等顏色變化，這種變化非常靈敏，且多與患者的病情進(jìn)展和治療預(yù)后明顯相關(guān)。
　　 祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肝臟與舌有著密切的聯(lián)系，《靈樞·經(jīng)脈》中提到：“厥陰者肝脈也，……而脈絡(luò)于舌本也”，故肝臟的異常可在舌上出現(xiàn)相應(yīng)的改變。

2、已有的相關(guān)研究提示，異常舌下絡(luò)脈形成可能與上述患者伴有的門靜脈壓力增高有關(guān)，如靳士英等通過動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)舌下絡(luò)脈異?？赡芘c門脈高壓時引起的舌靜脈壓力升高有關(guān)，還有人對118例門脈高壓患者采用術(shù)中測壓和觀察舌下絡(luò)脈病理變化相結(jié)合的方法研究發(fā)現(xiàn)，門脈高壓癥患者的舌下絡(luò)脈曲張率為100％。我們階段性的研究結(jié)果也顯示，原發(fā)性肝癌患者舌下絡(luò)脈異常與肝門脈血管及其局部血液動力學(xué)某些指標(biāo)直接相關(guān)。但門脈高壓與異常舌下絡(luò)脈形成之間的關(guān)聯(lián)，尤其是門脈高壓過

3、程中引起舌下絡(luò)脈產(chǎn)生變化的分子機(jī)制目前尚不清楚。我們認(rèn)為，舌下絡(luò)脈和肝門靜脈作為人體靜脈血管系統(tǒng)的組成部分，二者在病理上必然存在密切的內(nèi)在聯(lián)系。并注意到肝癌和肝硬化過程中患者異常的舌下絡(luò)脈不僅表現(xiàn)為絡(luò)脈顏色、形狀等的異常，更會在絡(luò)脈周圍出現(xiàn)瘀點(diǎn)以及周圍瘀血細(xì)絡(luò)增多等特點(diǎn)，這很難簡單地用門靜脈壓力增高引起舌下絡(luò)脈被動擴(kuò)張來完整解釋。這也提示我們，肝硬化門靜脈高壓癥異常舌下絡(luò)脈表現(xiàn)有其更深層次的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 隨著現(xiàn)代腫瘤學(xué)和分子

4、生物學(xué)研究的不斷深入，逐步揭示了血管形成的分子機(jī)制。在成體中生理性和病理性的血管生成機(jī)制是血管的主要形成方式。許多分子在血管生成中起著正向調(diào)節(jié)作用。在所有己知的血管生成調(diào)控因子中，血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)是最主要的。缺氧反應(yīng)、機(jī)械應(yīng)力等多種機(jī)制參與了VEGF基因的誘導(dǎo)。低氧情況下，缺氧誘導(dǎo)因子-1(Hypoxia-inducible factor1，HIF-1)通

5、過刺激VEGF的轉(zhuǎn)錄和增強(qiáng)VEGFmRNA的穩(wěn)定性從而增加VEGF蛋白的表達(dá)。VEGF通過內(nèi)皮型一氧化氮合酶刺激一氧化氮的合成，介導(dǎo)血管的擴(kuò)張及增加其滲透性。近年來的研究也己證實(shí)，門靜脈高壓癥過程中肺臟和脾臟中也存在血管生成現(xiàn)象。我們注意到異常舌下絡(luò)脈在形態(tài)上的多樣性、紊亂無序與不同亞型VEGF誘導(dǎo)的血管生成的表現(xiàn)有相似之處。因此設(shè)想根據(jù)“血管生成”理論，重點(diǎn)從血管生成的角度，探討肝硬化門脈高壓模型異常舌下絡(luò)脈形成可能的分子機(jī)制。

6、>　　 [目的]
　　 本研究擬通過制備肝硬化門脈高壓犬模型，觀察其舌下絡(luò)脈的變化，并從血管生成的角度，探尋VEGF與異常舌下絡(luò)脈間的關(guān)系。為揭示異常舌下絡(luò)脈形成的分子機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。
　　 [方法]
　　 將Beagle犬隨機(jī)分為正常組和模型組。以二甲基亞硝胺(dimethylnitrosamine，DMN)誘導(dǎo)制備肝硬化門脈高壓犬模型，觀察舌下絡(luò)脈形態(tài)、顏色；生物電記錄系統(tǒng)測定其門脈壓力；硝酸還原酶法測定

7、犬血清中NO濃度；ELISA法檢測血清中VEGF、HIF-1α表達(dá)量；免疫組織化學(xué)方法檢測犬舌組織血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及低氧誘導(dǎo)因子(hypoxiainducible factor1α，HIF-1α)的表達(dá)；Real-Time PCR檢測VEGFmRNA、HIF-1αmRNA的表達(dá)水平。
　　 [結(jié)果]
　　 模型組Beagle犬舌下血管形態(tài)學(xué)

8、和顏色較正常組出現(xiàn)了明顯改變，表現(xiàn)為下絡(luò)脈出現(xiàn)迂曲增粗，細(xì)絡(luò)增多顏色暗紅，甚至紫暗；模型犬血清NO濃度顯著升高，VEGF、HIF-1α蛋白表達(dá)顯著增高；正常對照組犬舌下血管VEGF、HIF-1α幾乎無表達(dá)，模型組犬可見VEGF、HIF-1α蛋白表達(dá)顯著增高，VEGFmRNA、HIF-1αmRNA也隨之顯著增高。
　　 [結(jié)論]
　　 門靜脈壓力增高為肝硬化模型犬異常舌下絡(luò)脈形成的重要直接因素，VEGF誘導(dǎo)的血管生成參與了