Th17、Th1和Tc1細(xì)胞亞群在慢性乙型肝炎及慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者中的變化及意義.pdf

1、第一部分Th17、Th1和Tc1細(xì)胞亞群在慢性乙型肝炎患者中的變化及意義
　　 慢性乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,宿主免疫調(diào)節(jié)的紊亂是導(dǎo)致病毒不能有效清除、病情遷延不愈、引起慢性炎癥、造成肝臟病變的重要因?yàn)?。許多研究表明Th1、Th2細(xì)胞亞群的比例失衡、功能失調(diào)是導(dǎo)致慢性乙肝發(fā)病的重要因素。傳統(tǒng)上,CD4+輔助T細(xì)胞(Th)和CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc)根據(jù)各自分泌的細(xì)胞因子的不同,可以將T細(xì)胞分為兩類:Ⅰ類T細(xì)胞(Th1和Tc

2、l,合稱T1)和Ⅱ類T細(xì)胞(Th2和Tc2,合稱T2),前者主要分泌干擾素γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素(IL)-2、腫瘤壞死因子(TNF)-β,后者主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13,并且常以IFN-γ/IL-4代表T1/T2的比例。T1和T2在免疫調(diào)節(jié)中均發(fā)揮重要作用,它們各自分泌的細(xì)胞因子對(duì)免疫應(yīng)答效應(yīng)起關(guān)鍵作用。CD8+T細(xì)胞可分為Tc1和Tc2兩個(gè)細(xì)胞亞群,Tc1與Th1亞群相似,可分泌IL-2、IFN

3、-γ等細(xì)胞因子并且可發(fā)揮細(xì)胞毒作用。
　　 Th17細(xì)胞是最近發(fā)現(xiàn)的一種新的效應(yīng)性CD4+T細(xì)胞亞群,以產(chǎn)生分泌白介素17(IL-17)為特征。Th17細(xì)胞與Th1和Th2細(xì)胞無(wú)論在分化途徑、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)還是生物學(xué)功能等方面均有所不同。大量證據(jù)表明Th17細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生IL-17作用于不同的靶細(xì)胞,誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子產(chǎn)生,參與細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié),觸發(fā)炎癥遞質(zhì)釋放,從而介導(dǎo)炎性反應(yīng)(防御胞外病原菌的感染)、自身免疫性疾病、腫瘤和移植排斥等病

4、理狀態(tài)的發(fā)生和發(fā)展。迄今為止,有關(guān)慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細(xì)胞的研究報(bào)道很少。
　　 目的：
　　 本研究的目的是通過(guò)對(duì)慢性乙型肝炎患者外周血Th17、Th1和Tc1細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子的檢測(cè),進(jìn)一步探討三種細(xì)胞亞群在慢性乙型肝炎患者發(fā)病機(jī)制中的作用及評(píng)價(jià)它們的臨床相關(guān)性。
　　 方法：
　　 應(yīng)用三色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)慢性乙型肝炎患者和正常對(duì)照外周血中Th1、Th17和Tc1細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞的

5、比例。三種細(xì)胞亞群的界定分別為:Th17細(xì)胞為CD3+CD8-IL-17A+,Th1細(xì)胞為CD3+CD8-IFN-γ+,Tc1細(xì)胞為CD3+CD8+IFN-γ+；應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)慢性乙型肝炎患者和正常對(duì)照血漿中IL-17和IFN-γ的表達(dá)水平。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)IL-17及IFN-γ在慢性乙型肝炎患者和正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、慢性乙型肝炎患者外周血Th

6、1細(xì)胞的比例(8.55±1.53％)明顯低于正常對(duì)照組(10.56±1.91％)(P<0.01),并且慢性乙型肝炎患者Tcl細(xì)胞的比例(6.35±1.85％)較正常對(duì)照組(9.0±2.79％)亦顯著降低(P<0.05)。
　　 2、慢性乙型肝炎患者Th17細(xì)胞的比例(1.53±0.52％)較正常對(duì)照(0.92±0.20％)顯著升高(P<0.05)。
　　 3、在慢性乙型肝炎患者中,Th1與Tc1細(xì)胞間存在明顯的正相關(guān)性(

7、r=0.58,P<0.05),Th17與Th1細(xì)胞間亦存在顯著的負(fù)相關(guān)性(r=-0.56,P<0.05),但Th17與Tc1細(xì)胞間無(wú)相關(guān)性。
　　 4、慢性乙型肝炎患者血漿中IFN-γ和IL-17表達(dá)水平與正常對(duì)照相比均無(wú)顯著性差異。
　　 5、在慢性乙型肝炎患者中,外周血中Th17細(xì)胞亞群的比例與ALT呈明顯正相關(guān)(r=0.66,P<0.05)。慢性乙型肝炎患者外周血中Th1細(xì)胞亞群的比例與ALT呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0

8、.68,P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 我們的研究結(jié)果進(jìn)一步表明,在慢性乙型肝炎的異常免疫反應(yīng)中,Th1和Tc1型免疫反應(yīng)受到抑制。尤為重要的是,我們研究首次表明,在慢性乙型肝炎發(fā)生和發(fā)展中,Th17細(xì)胞亞群比例增加可能是一個(gè)重要的決定因素,調(diào)節(jié)慢性乙型肝炎患者中Th17細(xì)胞的異?？赡艹蔀槁砸倚透窝字委煹男虏呗?。
　　 第二部分Th17、Th1和Tc1細(xì)胞亞群在慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者中的變化及意義

9、
　　 HBV感染可引起人類急慢性肝炎,與肝硬化和肝細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān),我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū),在全球3.5億HBV攜帶者中,約9300萬(wàn),發(fā)展為慢性乙型肝炎的患者大約有2500萬(wàn),其中每年約有1％的乙型肝炎患者發(fā)展為重型肝炎。重型肝炎(肝衰竭)可被分為四類:急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)、亞急性肝衰竭(subacute liver failure,SALF)、慢加急性肝衰竭(acute-o

10、n-chronicliver failure,ACLF)和慢性肝衰竭(chronic liver failure,CLF)。慢加急性肝衰竭是在慢性肝病基礎(chǔ)上出現(xiàn)的急性肝臟功能失代償。
　　 在我們的第一部分實(shí)驗(yàn)中,我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者外周血中Th1,Tc1細(xì)胞的比例明顯低于正常對(duì)照。提示患者細(xì)胞免疫功能低下,不能有效清除體內(nèi)的HBV,使HBV持續(xù)感染形成慢性化。Th17細(xì)胞亞群比例增加可能是一個(gè)重要的決定因素。
　

11、　 在我國(guó),慢性乙型病毒性肝炎是引起慢加急性肝衰竭的主要病因,有報(bào)道稱CHB占ACLF所有病因的80％。由慢性乙型病毒性肝炎所致的慢加急性肝衰竭又稱為慢加急性重型乙型病毒性肝炎(ACHBLF)。ACHBLF進(jìn)展迅速,病情兇險(xiǎn),臨床上缺乏特異、有效的治療手段,絕大部分患者預(yù)后較差,易出現(xiàn)各種并發(fā)癥而危及患者的生命,雖然近年來(lái)在ACHBLF的發(fā)病機(jī)制、臨床診斷、治療等方面取得了很大的進(jìn)展,但死亡率仍高達(dá)50％-60％。目前,慢性乙型肝炎出

12、現(xiàn)急性肝功能失代償引起ACHBLF精確機(jī)制尚不明確,明確其發(fā)病機(jī)制必將提高ACHBLF的治療水平,降低其死亡率。
　　 目的：
　　 本研究的目的是通過(guò)對(duì)慢加急性乙型病毒性肝炎患者外周血Th17、Th1和Tc1細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子的檢測(cè),進(jìn)一步探討三種細(xì)胞亞群在慢加急性乙型病毒性肝炎患者發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：
　　 應(yīng)用三色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)慢加急性乙型病毒性肝炎患者和正常對(duì)照外周血中Th1、Th

13、17和Tcl細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞的比例。三種細(xì)胞亞群的界定分別為:Th17細(xì)胞為CD3+CD8-IL-17A+,Th1細(xì)胞為CD3+CD8-IFN-γ+,Tc1細(xì)胞為CD3+CD8+IFN-γ+；應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)慢加急性乙型病毒性肝炎患者和正常對(duì)照血漿中IL-17和IFN-γ的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、慢加急性乙型病毒性肝炎患者外周血Thl細(xì)胞的比例(8.55±1.53％)明顯低于正常對(duì)照組(10.56±

14、1.91％)(P<0.01),并且慢加急性乙型病毒性肝炎患者Tc1細(xì)胞的比例(6.35±1.85％)較正常對(duì)照組(9.0±2.79％)亦顯著升高(P<0.05)。
　　 2、慢加急性乙型病毒性肝炎患者Th17細(xì)胞的比例(1.53±0.52％)較正常對(duì)照(0.92±0.20％)顯著升高(P<0.05)。
　　 3、在慢加急性乙型病毒性肝炎患者中,Th17與Th1細(xì)胞間亦存在顯著的正相關(guān)性(r=0.61,P<0.05),但T

15、h17與Tc1細(xì)胞間無(wú)相關(guān)性。
　　 4、慢加急性乙型病毒性肝炎患者血漿中IFN-γ和IL-17表達(dá)水平與正常對(duì)照相比均無(wú)顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 我們的研究結(jié)果進(jìn)一步表明,在慢加急性乙型病毒性肝炎的異常免疫反應(yīng)中,Th1和Tc1型免疫反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)地位,并且Tc1細(xì)胞在慢加急性乙型病毒性肝炎的發(fā)病中可能發(fā)揮了細(xì)胞毒作用和免疫調(diào)節(jié)的雙重作用。尤為重要的是,我們研究首次表明,在慢加急性乙型病毒性肝炎發(fā)生和發(fā)展中