NF-κB、MAPKs等信號通路在TMT致神經元損害中的作用與機制研究.pdf

1、20世紀80年代中期以來，世界各地相繼在多種樣本如海水、海洋生物、海洋底泥、城市污水、河水中證實了有機錫化合物的存在。以往TMT中毒主要是由于職業(yè)接觸，近年來除了職業(yè)中毒外，通過生活用品、飲用水、食物中毒的事件也有報導。有機錫化合物廣泛用于船舶行業(yè)，海洋生態(tài)環(huán)境中存在大量的TMT，對水產生物動物造成嚴重的影響，且TMT有生物蓄積作用，人類食用海產品可能引起TMT中毒，因此TMT由工業(yè)毒物逐漸轉變?yōu)榄h(huán)境污染物，影響人類的日常生活。

2、　　文章通過建立TMT中毒的體外細胞模型,研究TMT對細胞的毒性作用及NF-κB、MAPKs等信號通路的影響。采用了MTT法測定細胞存活率;流式細胞術檢測細胞凋亡;免疫細胞化學、免疫熒光技術、WB檢測NF-κB信號通路的激活;免疫細胞化學檢測Ub的變化;WB檢測MAPKs、p-Akt、Bcl-2、XIAP等蛋白的變化。結果表明TMT引起SH-SY5Y細胞泛素表達增加,IκBα降解,NF-κB p65核轉位增加,p-ERK1/2、p-JN

3、K、p-p38增加,p-Akt降低,提示NF-κB、UPPs、MAPKs、Akt信號通路可能參與TMT的毒作用機制。
　　通過以不同信號通路的特異性抑制劑為工具,從蛋白表達層面研究TMT致細胞凋亡模型中NF-κB與MAPKs等其他信號通路的“Cross-talk”,并觀察各抑制劑對TMT致細胞凋亡的影響,試圖探明其毒性途徑，來說明TMT致SH-SY5Y凋亡模型中NF-κB與MAPKs等其他信號通路的“Cross-talk”。采用M

4、G132、BAY11-7082、SP600125、U0126、LY294002分別預處理SH-SY5Y細胞2h,TMT染毒24h的方法,提取蛋白,WB檢測蛋白表達變化;流式細胞術檢測各抑制劑對TMT導致的細胞凋亡的影響。表明在TMT致細胞凋亡模型中,NF-κB、泛素蛋白酶體信號通路的激活可使Bcl-2、XIAP表達增加,具有拮抗細胞凋亡的作用,泛素蛋白酶體信號通路參與NF-κB的激活;而JNK、ERK1/2信號通路的激活使Bcl-2、X

5、IAP表達減少,則促進細胞凋亡。
　　途徑研究表明各信號通路間存在“Cross-talk”: NF-κB與JNK信號通路相互抑制,JNK與ERK1/2信號通路間相互抑制,JNK促進p38信號通路的激活,而ERK1/2與NF-κB則抑制p38信號通路,ERK1/2對NF-κB信號通路也有抑制作用。這些信號通路間相互調節(jié),最終結局為 TMT使Bcl-2、XIAP蛋白表達減少,凋亡發(fā)生。
　　通過建立TMT中毒的體內模型,研究TM

6、T對大鼠學習記憶能力的影響。將40只雄性SD大鼠隨機分為4組,每組10只;TMT染毒劑量分別為0.75、1.5、3mg/kg以及溶劑對照組(雙蒸水);每日上午8點經口灌胃染毒,下午兩點進行水迷宮實驗,晚上8點進行一般行為學評分與癲癇評分,共6天;末次染毒24h后斷頭處死動物,收集血液,分離血清,測定血液生化指標及血清鉀離子濃度;分離臟器,計算臟器系數(shù);每只動物大腦一分為二,一半用于制備石蠟切片,一半分離海馬、皮層等,凍存?zhèn)溆谩＝Y果表明,

7、3mg/kgTMT可引起SD大鼠中毒,觀察到震顫、易激惹、攻擊性、癲癇發(fā)作等癥狀,以及血清鉀離子濃度明顯下降等特異性中毒特征,TMT對學習記憶能力也有顯著的影響。
　　觀察TMT對海馬神經元的損傷及分子生物學機制研究，采用尼氏染色觀察神經元損傷;流式細胞術測定大鼠海馬神經元凋亡率;免疫組織化學法檢測泛素水平變化;Western blot檢測NF-κB、MAPKs等信號通路蛋白變化。在整體動物模型中,TMT可導致神經元尼氏體丟失,神