移植肝通血前后組織中體液和細(xì)胞免疫標(biāo)志物的變化.pdf

1、目的：1.觀察移植肝保存損傷的光鏡和電鏡結(jié)構(gòu)。 2.觀察移植肝通血前后體液免疫標(biāo)記和細(xì)胞亞群的變化。 3.乙型肝炎供肝與正常供肝之間保存損傷及體液、細(xì)胞免疫反應(yīng)的差異。 4.觀察2例移植肝小葉中央型急性排斥中有無(wú)體液免疫反應(yīng)參與。 方法： 1.標(biāo)本 1.1第一部分收集收集2007年5月至2009年1月本院肝移植患者供肝通血前、后標(biāo)本34例，共計(jì)68份標(biāo)本。其中男性30例，女性4例，年齡26

2、～71歲，中位年齡47.5歲?；颊呷繛槁砸倚筒《靖窝祝渲邪橛懈伟?8例，急性肝功能衰竭1例，亞急性肝功能衰竭1例，慢性肝功能衰竭12例。供者34例，全部為男性，年齡25～30歲，腦外傷死亡。分為兩組，其中一組21例供肝為正常肝組織，無(wú)乙型肝炎病毒感染(簡(jiǎn)稱NHB-D)；另一組13例有輕度慢性乙型肝炎(簡(jiǎn)稱HB-D)。 1.2第二部分標(biāo)本：供肝標(biāo)本及對(duì)應(yīng)的受者病肝標(biāo)本來(lái)源均同第一部分，其中3例正常供肝通血前、后標(biāo)本留備電鏡標(biāo)

3、本。另選20例中度乙型慢性肝炎患者肝穿刺標(biāo)本作為對(duì)照組。 1.3第三部分標(biāo)本：兩例術(shù)后急性小葉中央型排斥肝穿刺組織，并以第一部分標(biāo)本作為對(duì)照。 2.所有標(biāo)本分別行HE，二步法免疫組化IgG、IgM、IgA、C3c、C4d、Clq和CD4、CD8、CD20、CD138、CD45ro、HBsAg和HBcAg染色；其中3例正常供肝通血前、后標(biāo)本做電鏡常規(guī)制片。 3.觀察各組光鏡下改變；各種抗原在肝小葉血竇內(nèi)皮和匯管區(qū)陽(yáng)

4、性表達(dá)，并按陽(yáng)性范圍分別計(jì)分：無(wú)為0分，<25％為1分，26～50％為2分，>50％為3分；透射電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)改變。 4.免疫組化評(píng)分結(jié)果采用等級(jí)資料的非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，用SPSS13.0軟件完成。 結(jié)果： 第一部分： 1.所有供肝在血供開放前后存在不同程度的保存損傷(PI)，NHB-D中～重度PI占57，1％，HB-D中～重度PI占92.3％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.024)。 2.供肝通血

5、前，肝細(xì)胞內(nèi)線粒體輕度腫脹，糖原分布均勻、致密，細(xì)胞核病變不明顯。通血后電鏡下可見肝細(xì)胞線粒體腫脹、變圓、呈球形、嵴斷裂、空泡增多；糖原顆粒稀疏分布；核膜不清楚、破壞、中斷，核異染色質(zhì)集合、成塊、固縮，染色質(zhì)濃縮成半月形或帽狀附于核膜；可見較多凋亡小體形成。 3.體液免疫反應(yīng)標(biāo)志物 IgG、IgM、IgA、C3c、C4d、Clq在NHB-D和HB-D組均有不同程度陽(yáng)性表達(dá)。沉積物形態(tài)表現(xiàn)為沿肝竇內(nèi)皮線狀或細(xì)顆粒狀沉積，

6、匯管區(qū)血管內(nèi)皮細(xì)顆粒沉積，匯管區(qū)間質(zhì)內(nèi)為粗顆粒沉積。組間比較結(jié)果如下。 (1)NHB-D組通血后肝小葉IgM、IgA和匯管區(qū)的IgG、IgM、IgA、Clq明顯高于通血前p<0.05)。 (2)HB-D組通血后肝小葉和匯管區(qū)的IgG、IgM、IgA、C3c、Clq明顯高于通血前p<0.05)。 (3)NHB-D組和HB-D組進(jìn)行比較，通血前兩組之間無(wú)明顯差異。通血后HB-D組的肝小葉Clq、C4d高于NHB-D組

7、p<0.05)。 4.細(xì)胞免疫標(biāo)志物 供肝通血前后組織中浸潤(rùn)細(xì)胞主要是CD45ro+T細(xì)胞，依次為CD8+T細(xì)胞、CD20+B細(xì)胞和CD138+漿細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞少見，穿孔素陰性。 NHB-D組或HB-D組通血前后，以及兩組之間進(jìn)行比較，各群細(xì)胞評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 第二部分： 移植供肝通血前后光鏡、電鏡均可見較多球形蛋白滴散在于肝血竇內(nèi)和肝細(xì)胞漿中，直徑1.5～2.5μM

8、，嗜伊紅色，免疫組化染色不同程度表達(dá)IgG、IgM、IgA、C3c陽(yáng)性。 第三部分： 2例移植肝小葉中央型排斥肝組織內(nèi)均可見免疫球蛋白沉積和補(bǔ)體激活現(xiàn)象。 結(jié)論： 1.移植肝通血后免疫球蛋白和補(bǔ)體表達(dá)較通血前明顯增加，但各種免疫細(xì)胞變化不明顯。 2.乙型肝炎供肝通血后產(chǎn)生的體液免疫反應(yīng)較正常供肝強(qiáng)。 3.移植供肝通血前后血竇內(nèi)及肝細(xì)胞漿中散在的球形蛋白滴，可能與移植肝保存液灌洗后殘留的血漿