羊膜淚道修復支架對兔淚小管損傷后愈合過程的影響.pdf

1、目的:
　　觀察羊膜淚道修復支架對兔淚小管損傷后愈合過程的影響,以及通過檢測炎癥細胞、CD31、a-SMA及Muc5AC在兔淚小管組織中的表達變化情況,并與傳統(tǒng)硅膠淚道支架對比,為羊膜淚道修復支架在淚道阻塞性疾病尤其是淚小管阻塞疾病的臨床應用提供實驗理論依據。
　　方法:
　　選取成年健康新西蘭兔30只,雌雄兼用,重1.8-2.0kg,無結膜炎、淚囊炎、眼瞼異常、眼球異常等眼部疾患及頭面部異常,淚小點位置正常,淚道沖洗

2、通暢。應用硬化劑(葡萄糖磷霉素鈉混合溶液)注入兔淚小管,其中3只作為空白組,剩余27只建立兔淚小管損傷模型,然后隨機分為三組,羊膜組和硅膠組分別進行羊膜淚道修復支架、淚道硅膠支架植入術,造模組造模后不做任何處理。分別于術后第1、2、4w三個不同時間點處死三組實驗動物,每組每次取材3只,解剖分離兔雙側淚小管,冰凍保存切片,并行常規(guī)HE染色觀察兔淚小管組織的炎性反應程度以及粘膜上皮細胞修復情況,用免疫組織化學染色和免疫熒光染色檢測兔淚小管組

3、織中的CD31和a-SMA的含量,間接反映淚小管組織的纖維化程度及炎性血管增生狀態(tài),同時檢測兔淚小管組織中Muc5AC粘蛋白表達情況,分析淚小管粘膜的組織學特點。
　　結果:
　　1、應用磷霉素鈉葡萄糖混合液硬化劑能夠成功制作兔淚小管損傷模型:HE染色結果顯示,正常兔淚小管粘膜表現(xiàn)為管壁光滑,上皮層為復層柱狀上皮,排列整齊,上皮下基質層結構疏松,可見少量正常血管,無炎性細胞浸潤,而造模后淚小管上皮層數(shù)明顯減少、變薄,上皮層結

4、構紊亂及出現(xiàn)缺損區(qū),炎性細胞大量浸潤,免疫組織化學染色和免疫熒光染色結果顯示,a-SMA及CD31表達明顯上調。2、造模后三組兔淚小管組織均可見上皮層細胞數(shù)量減少,結構紊亂,炎癥細胞浸潤,但羊膜組各觀察時間點,炎癥細胞數(shù)量明顯少于造模組及硅膠組,羊膜組術后第28天,淚小管上皮層數(shù)及結構與正常淚道上皮相當。3、免疫組織化學染色結果顯示,在正常兔淚小管組織中 CD31表達陽性,而a-SMA表達陰性,造模后三組各時間點兔淚小管組織中CD31與

5、a-SMA的表達逐漸增加,因處理方法不同,兩者在兔淚小管組織中的表達量發(fā)生變化。羊膜組和硅膠組中a-SMA和CD31的表達量少于造模組,羊膜組的表達又少于硅膠組。4、免疫熒光染色結果顯示,兔淚小管組織中粘蛋白 Muc5AC表達陰性,即兔淚小管上皮中缺乏杯狀細胞。
　　結論:
　　磷霉素鈉葡萄糖混合液硬化劑能夠成功制作兔淚小管的損傷模型;羊膜作為淚道生物性的修復支架材料,使受損兔淚小管的基質纖維化水平明顯被抑制,同時具有減輕炎