黏菌素對(duì)小鼠血腦屏障、氨基酸含量及PC12細(xì)胞膜的影響.pdf

1、過(guò)去的幾十年中，由于新型抗生素研發(fā)進(jìn)展緩慢及細(xì)菌多重耐藥問(wèn)題的加劇，黏菌素在臨床上常作為治療多重耐藥革蘭氏陰性菌感染的最有效藥物，甚至是最后防線。作為主要的毒副作用之一，神經(jīng)毒性一直以來(lái)限制著黏菌素的臨床應(yīng)用，但神經(jīng)毒性機(jī)制到目前為止尚不清楚。本課題組多年來(lái)一直致力于黏菌素神經(jīng)毒性方面的研究，前期已經(jīng)建立了黏菌素神經(jīng)毒性模型，在此基礎(chǔ)上，本文探討?zhàn)ぞ貙?duì)小鼠血腦屏障、氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)及大鼠嗜鉻瘤細(xì)胞(PC12)細(xì)胞膜的影響。
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2、明系雌性小鼠18～22 g，隨機(jī)分為四組，通過(guò)尾靜脈注射給予黏菌素15 mg·kg-1，分別給藥1，3和7d，對(duì)照組給予生理鹽水。每組最后一次給藥后24 h，取腦組織，分離大腦皮質(zhì)，進(jìn)行血腦屏障完整性評(píng)價(jià)（伊文斯蘭評(píng)價(jià)，血-腦屏障緊密連接超微結(jié)構(gòu)觀察，緊密連接Claudin-5基因及蛋白的表達(dá)）及腦組織中黏菌素含量、氨基酸含量、受體的變化測(cè)定。
　　另外以PC12細(xì)胞為研究對(duì)象，給予不同劑量的黏菌素(62.5、125μg·mL-1

3、)，通過(guò)MTT試驗(yàn)、培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)活性檢測(cè)、細(xì)胞膜掃描電鏡觀察，細(xì)胞膜ATP酶活性及唾液酸含量測(cè)定，探究黏菌素對(duì)PC12細(xì)胞膜的影響。結(jié)果表明:
　　(1)15 mg·kg-1黏菌素分別給藥1，3和7d后，與對(duì)照組比較，各組腦組織中伊文斯蘭含量沒(méi)有顯著差異(p＞0.05)，透射電鏡結(jié)果表明各組中血腦屏障緊密連接結(jié)構(gòu)沒(méi)有損傷，Claudin-5基因及蛋白的表達(dá)量無(wú)顯著差異(p

4、＞0.05)，提示在此劑量下黏菌素不會(huì)對(duì)小鼠血腦屏障造成損傷。
　　(2)黏菌素在15 mg·kg-1劑量下，盡管腦組織中黏菌素含量依然很少，但隨著給藥時(shí)間的增加，腦組織內(nèi)黏菌素含量也隨之增加，提示黏菌素在腦內(nèi)累積，這可能是其神經(jīng)毒性發(fā)生的原因之一。
　　(3)黏菌素給藥后引起了腦組織內(nèi)氨基酸及其受體含量的變化，隨著給藥時(shí)間的增加，谷氨酸(glutamate，Glu)及其受體含量顯著提高，γ-氨基丁酸(γ-aminobuty

5、ric acid，GABA)及其受體的變化趨勢(shì)與Glu一致，提示黏菌素神經(jīng)毒性可能與腦內(nèi)氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)含量變化密切相關(guān)。
　　(4)125μg·mL-1黏菌素給藥24 h后引起PC12細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，流動(dòng)性減弱，ATP酶活性減弱，唾液酸含量降低，提示黏菌素對(duì)細(xì)胞膜損害嚴(yán)重，這可能是黏菌素神經(jīng)毒性發(fā)生的機(jī)制之一。
　　綜上所述，在本次研究中，15 mg·kg-1黏菌素分別給藥1，3和7d后，均沒(méi)有損傷小鼠血-腦屏障，但隨著給