Ezrin在胰腺癌侵襲轉移中的作用及黃芩素對其表達的影響.pdf

1、目的：探討Ezrin在胰腺癌組織中的表達及其在胰腺癌惡性進展中的作用。并通過觀察黃芩素對PANC-1細胞Ezrin表達的影響，探討黃芩素抗腫瘤作用的可能機制。 方法：收集1997年2月～2005年9月中南大學湘雅醫(yī)院和河南大學淮河醫(yī)院手術切除的46例胰腺癌石蠟包埋組織標本及同期其他手術切除的13例正常胰腺石蠟包埋組織標本，運用免疫組織化學染色(SABC)方法觀察Ezrin在胰腺癌組織的表達情況，并分析其表達與胰腺癌臨床病理因素和

2、預后的關系。 體外培養(yǎng)人胰腺癌PANC-1細胞，通過化學合成的小干擾RNA(siRNA)下調人胰腺癌PANC-1細胞Ezrin表達后，運用MTT法、流式細胞儀、劃痕愈合實驗(Wound healing assay)、掃描電鏡和侵襲小室實驗(Transwell assay)等方法，觀察腫瘤細胞增殖、細胞周期、偽足形成、侵襲和遷移能力的改變。并用Western Blot和RT-PCR檢測黃芩素干預后腫瘤細胞Ezrin蛋白、磷酸化Ez

3、rin蛋白及EzfinmRNA表達的變化。 結果：免疫組織化學染色顯示胰腺癌組織中Ezrin陽性表達率為89.1％(41/46)，其中，強陽性表達率為45.7％(21/46)，正常胰腺組織中Ezrin陽性表達率為53.8％(7/13)。癌組織中陽性表達率顯著高于正常胰腺組織(P=0.009，F(xiàn)isher精確檢驗)。Ezrin強陽性表達率隨腫瘤分化程度的降低而增高(X2=7.725，P=0.021)；有淋巴結轉移者Ezrin強陽性

4、表達率顯著高于無淋巴結轉移者(X2=3.989，P=0.046)，但其表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期無關。值得注意的是Ezrin在淋巴管或血管癌栓組織中均呈強陽性表達。Ezrin強陽性表達組術后中位生存時間為16個月(9-36個月)，Ezrin呈弱陽性及陰性表達組術后中位生存時間為24個月(8～50個月)，經log-rank檢驗，兩組差異有顯著意義(X2=4.860，P=0.0276)。 Western印跡結果顯示，E

5、zrin siRNA對Ezrin蛋白表達水平有顯著的下調作用。下調Ezrin蛋白后，PANC-1細胞增殖明顯被抑制，G2/M期細胞顯著降低(P<0.05)；同時伴隨著S期細胞減少，而G0/G1期增加，細胞偽足形成顯著減少，腫瘤細胞的運動侵襲能力下降，穿過人工基底膜的細胞數量明顯減少，與干擾前比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，但未觀察到RNA干擾對細胞凋亡有影響。 黃芩素對PANC-1細胞增殖的抑制作用隨時間的延長和藥物濃度的

6、增加，抑制作用逐漸增強，呈明顯的時間和劑量依賴性；WestemBlot和RT-PCR結果顯示，黃芩素明顯降低Ezrin、磷酸化Ezrin及Ezrin-mRNA在PANC-1細胞中的表達，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論： 1、Ezrin在胰腺癌組織中存在過表達，且其表達水平與胰腺癌侵襲轉移和預后密切相關，提示Ezrin可以作為反映胰腺癌預后的一種有價值的分子標志物。 2、siRNA下調Ezri