GDF-5聯(lián)合地塞米松誘導(dǎo)大鼠BMSCs向類(lèi)髓核樣細(xì)胞分化的作用.pdf

1、目的:探討 GDF-5聯(lián)合地塞米松誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向類(lèi)髓核樣細(xì)胞分化潛能及其表型的改變。
　　方法:用全骨髓貼壁法及序貫酶消化法分別分離培養(yǎng)大鼠BMSCs和髓核細(xì)胞(NPCs),并采用流式細(xì)胞術(shù),通過(guò)CD90、CD45、CD44、CD11抗體行BMSCs表面標(biāo)記物的鑒定,以及通過(guò)Ⅱ型膠原蛋白行免疫組化染色鑒定NPCs及其純度分析。實(shí)驗(yàn)均取第3代細(xì)胞分為1)對(duì)照組BMSCs組,2)BMSCs+Dex組3) BM

2、SCs+GDF-5組4)BMSCs+Dex+GDF-5組(聯(lián)合誘導(dǎo)組)5)NPCs組。誘導(dǎo)培養(yǎng)21d,鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及密度變化,阿辛藍(lán)染色檢測(cè)蛋白多糖含量,RT-PCR檢測(cè)COL1、ACAN、SOX9及COL2和髓核細(xì)胞陽(yáng)性基因KRT19、PAX1和FOXF1的表達(dá)。Western blot檢測(cè)COL2及COL1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:BMSCs形態(tài)呈長(zhǎng)梭型、漩渦樣生長(zhǎng);NPCs呈球形、島狀生長(zhǎng)的特點(diǎn);BMSCs經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定示

3、:CD90及CD44呈高表達(dá)趨勢(shì),分別為96.76％和98.09%。而造血系統(tǒng)的標(biāo)志CD45及CD11呈低表達(dá),分別為8.25%和2.91%。Ⅱ型膠原蛋白免疫組化后NPCs的陽(yáng)性率為95.35±1.02%。誘導(dǎo)后BMSCs向類(lèi)圓形、三角形轉(zhuǎn)變,細(xì)胞體積縮小,胞質(zhì)顏色與對(duì)照組相比逐漸加深;蛋白多糖分泌增加,以聯(lián)合誘導(dǎo)效果最佳。ACAN、SOX9、COL2基因的相對(duì)表達(dá)量逐漸增高,ACAN/COL2的比例呈遞增趨勢(shì),COL1的表達(dá)呈遞減趨勢(shì)