小檗胺和小檗胺衍生物抗骨髓瘤細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文小檗胺和小檗胺衍生物抗骨髓瘤細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究姓名：梁赟申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師：趙小英20100401浙江大學(xué)博士學(xué)位論文摘要到多種與細(xì)胞增殖分化密切相關(guān)的信號通路，這些分子機(jī)制的發(fā)現(xiàn)提示BBM可能具有更廣泛的抗腫瘤譜。同時，小檗胺為一種天然的小分子化合物，其結(jié)構(gòu)式公開，可以對其進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾從而產(chǎn)生系列小檗胺衍生物。本研究首次以入骨髓瘤細(xì)胞株為研究對象，探討小檗胺體外抗骨髓瘤作

2、用及其可能機(jī)制，并從小檗胺衍生物中篩選出高效低毒的抗骨髓瘤的先導(dǎo)化合物，進(jìn)一步從分子水平明確小檗胺衍生物對腫瘤相關(guān)信號通路的影響及可能的作用靶位，從而為后續(xù)新型抗骨髓瘤藥物的研發(fā)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第一部分小檗胺抗骨髓瘤細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究目的：研究小檗胺對人骨髓瘤細(xì)胞株增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用并探討其相關(guān)機(jī)制。方法：MTT法檢測小檗胺單用及聯(lián)合常規(guī)抗骨髓瘤藥物(地塞米松，阿霉素，砷劑)對人骨髓瘤細(xì)胞株KM3，RPMl8226和U266的增

3、殖抑制作用；Wright—Giemsa染色觀察藥物作用前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期及凋亡細(xì)胞百分比；間接免疫熒法觀察BBM干預(yù)后p65蛋白改變及亞細(xì)胞定位；Westernblot檢測BBM作用前后p65，IrBtx激酶a(IrBakinase，IKKot)，Ird3ct，P—IrBa，TNFAIP3(A20)，cyclinD1，Bcl2，BAX，BclXL，Bid及survivin蛋白的表達(dá)。結(jié)果：BBM可以抑制KM3，R

4、PMl8226和U266細(xì)胞的增殖，呈濃度依賴及時間依賴性，48h對三株細(xì)胞的IC50值分別為509I_tg／ml，38399／ml，471／tg／ml，并且低劑量的BBM與常規(guī)化療藥物聯(lián)合48h后可以增加抗腫瘤效應(yīng)；流式細(xì)胞術(shù)檢測BBM作用后KM3細(xì)胞發(fā)生G1／S期阻滯，8pg／mlBBM作用36h后KM3細(xì)胞凋亡率從對照組的054％升至5183％，并且光鏡下可見凋亡特征性形態(tài)學(xué)改變；8“∥mlBBM作用KM3細(xì)胞24h后能明顯下調(diào)I