黃連水提液和小檗堿的細胞毒性及其機制研究.pdf

1、黃連為常用中草藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載其性寒，味苦，入心、肝、胃、大腸經(jīng)，有清熱燥濕、瀉火解毒之功效。現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，黃連及其主要成分小檗堿還具有抗菌抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗老年癡呆癥、保肝、止痛和抗高血糖等諸多生物學活性。近年來，隨著中藥不良反應(yīng)事件頻發(fā)，黃連和小檗堿的安全性問題引起廣泛關(guān)注，主要見于引起錐體外反應(yīng)、心律失常，甚至死亡等，但二者在細胞水平上的毒性機制研究未見報道。
　　本文以體外培養(yǎng)的L929、BRL、GES-

2、1和NRK四種細胞為研究對象，通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，CCK-8法檢測細胞存活率，流式細胞儀檢測細胞周期分布和活性氧水平，彗星試驗檢測DNA損傷情況，對黃連和小檗堿的細胞毒性及作用機制進行初步探討。具體試驗結(jié)果如下：
　　（1）黃連對四種細胞形態(tài)的影響結(jié)果：黃連在分別高于1 mg/mL、0.25 mg/mL、0.25 mg/mL和3 mg/mL的濃度時，可明顯改變L929、BRL、GES-1和NRK四種細胞的正常形態(tài)，甚至

3、出現(xiàn)脫落和漂浮。
　　（2）細胞存活率檢測結(jié)果：黃連在高于1 mg/mL、0.1 mg/mL、0.25 mg/mL和3 mg/mL的濃度時，分別對L929、BRL、GES-1和NRK四種細胞的存活率有顯著抑制作用，呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系；小檗堿在高于0.05 mg/mL、0.04 mg/mL、0.05 mg/mL和0.25 mg/mL濃度時，L929、BRL、GES-1和NRK四種細胞存活率與對照組相比具有統(tǒng)計學差異（P<0.01

4、）；同時，在顯示出增殖抑制之前，黃連和小檗堿均表現(xiàn)出低濃度促進細胞生長的作用。
　?。?）細胞周期分布檢測結(jié)果：黃連分別在2 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL和3 mg/mL的濃度，小檗堿分別在0.1 mg/mL、0.05 mg/mL、0.05 mg/mL和0.25 mg/mL的濃度時，均可引起L929、BRL、GES-1和NRK四種細胞周期的阻滯，且在兩種藥物分別作用下，除BRL細胞發(fā)生G0/G1期阻滯外，其他三種細胞

5、均發(fā)生G2/M期細胞周期停滯。
　?。?）活性氧水平檢測結(jié)果：黃連分別在2 mg/mL、0.25 mg/mL、0.25 mg/mL和1 mg/mL的濃度，小檗堿分別在0.05 mg/mL、0.005 mg/mL、0.005 mg/mL和0.05 mg/mL的濃度時，均可引起L929、BRL、GES-1和NRK四種細胞內(nèi)活性氧水平的升高。
　?。?）DNA損傷檢測結(jié)果：黃連分別在0.1 mg/mL、0.05 mg/mL、0.0

6、5 mg/mL和1.5 mg/mL的濃度，小檗堿分別在0.0125 mg/mL、0.004 mg/mL、0.005 mg/mL和0.025 mg/mL的濃度時，均可顯著誘導L929、BRL、GES-1和NRK四種細胞DNA的損傷，且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。
　　結(jié)論：
　　（1）黃連和小檗堿在較低濃度下能夠促進L929、BRL、GES-1、NRK四種體外培養(yǎng)細胞的生長；
　?。?）黃連和小檗堿在較高濃度下能夠顯著抑制四種