鴨腸炎病毒ul45-,（68aa）-和ul47基因原核表達及其抗血清中和活性的鑒定.pdf

1、鴨病毒性腸炎(DVE)，又名鴨瘟(DP)是由鴨腸炎病毒(DEV)引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病，其特征是流行廣泛，傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高。鴨腸炎病毒屬于皰疹病毒科，未分類病毒屬。DEV分子生物學研究落后于其它皰疹病毒，目前其基因組結(jié)構(gòu)和物理圖譜尚屬未知。本研究圍繞DEVUul45和ul47基因，對其功能進行了初步研究。DEVUL45和ULA7編碼外膜蛋白，目前未見有對其功能研究的報道。HSV-1UL45蛋

2、白在病毒誘導的細胞與細胞間的融合過程中起關鍵作用；PrVUL47蛋白對病毒在細胞質(zhì)中的組裝過程中起重要作用。BHV-1ULA7蛋白是BHV-1病毒顆粒重要的結(jié)構(gòu)蛋白。 本研究參照GenBank上發(fā)表的基因序列(序列號為EF153413)，設計克隆ul45親水區(qū)68aa.的引物p1/p2，克隆UL47ORF引物p3/p4:以DEV核酸為模板克隆ul45(68aa)與ul47基因。構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-ULul45(68aa)

3、和pMD18-T-ul47之后，構(gòu)建了原核重組表達質(zhì)粒pGEX-6p-ul45(68aa)和pET30a-ul47，將陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達受體菌Rosetta感受態(tài)細胞中，經(jīng)IPTG誘導表達，均獲得原核表達蛋白。將原核表達的蛋白進行純化，免疫家兔，制備多克隆抗體，測得兔抗UL45(68aa)和UL47多克隆抗體的瓊擴效價分別為1:8和1:16。利用間接免疫熒光實驗進行UL45和UL47蛋白在感染細胞中的定位，結(jié)果表明，DEVUL45蛋白