斑蝥酸鈉維生素B6注射液誘導(dǎo)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63凋亡及其機制的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文斑蝥酸鈉維生素B6注射液誘導(dǎo)人骨肉瘤細(xì)胞MG63凋亡及其機制的研究姓名：康肖申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：扈文海20090301中文摘要胞，用體積分?jǐn)?shù)為25％戊二醛4。C固定，用10g／L鋨酸后固定，丙酮系列脫水，最后用Epon812環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片機切片，醋酸鈾與檸檬酸鉛雙重染色，電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)并拍照。5反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)檢測SurvivinmRNA的表達(dá)：實驗組和對照組細(xì)

2、胞進(jìn)行培養(yǎng)，收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA。采用一步法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和擴增。將RTPCR產(chǎn)物用15％瓊脂糖凝膠電泳后，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)及凝膠分析軟件對電泳條帶進(jìn)行成像分析，用Survivin吸光度與13actin吸光度的比值代表Survivin的相對含量。結(jié)果：l用不同濃度的斑蝥酸鈉維生素B6注射液作用于MG63細(xì)胞后結(jié)果顯示斑蝥酸鈉維生素B6注射液能明顯抑制細(xì)胞的增殖，并呈劑量和時間依賴性。抑制率最高可達(dá)到(685652l、)％。2倒置顯微鏡

3、下觀察對照組細(xì)胞呈貼壁生長，生長狀態(tài)良好，細(xì)胞透明，呈長梭形，顆粒較少，細(xì)胞間界限清楚，細(xì)胞核隱約可見。經(jīng)斑蝥酸鈉維生素B6注射液處理組細(xì)胞，隨斑蝥酸鈉維生素B6注射液濃度的增加和作用時間的延長，細(xì)胞逐漸變圓，呈漂浮狀態(tài)生長的細(xì)胞數(shù)量明顯增加，細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)受到破壞，存活細(xì)胞顯著減少，至5099／ml時大部分細(xì)胞裂解，可見多量細(xì)胞碎片。透視電鏡觀察可見典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)改變：細(xì)胞皺縮，胞膜結(jié)構(gòu)保持完整，胞核固縮，核碎裂，染色質(zhì)濃縮邊集，形