小麥幾丁質(zhì)酶基因的檢測(cè)及酶活性研究.pdf

1、幾丁質(zhì)酶(chitinase，EC3．2．1.14)作為一種重要的病程相關(guān)蛋白，一直是植物抗菌基因工程的研究熱點(diǎn)之一。同時(shí)幾丁質(zhì)酶也是一種誘導(dǎo)酶，多種生物和非生物因素均可誘導(dǎo)幾丁質(zhì)酶基因的表達(dá)。本文從 NCBI 上已經(jīng)報(bào)道的小麥屬幾丁質(zhì)酶Chi1,Chi2,Chi3,Cht2,以及Cht4五個(gè)基因序列中分析比較并用Primer軟件分別設(shè)計(jì)了多對(duì)引物，對(duì)中國(guó)小麥微核心種質(zhì)中隨機(jī)選取的 94個(gè)小麥品種和國(guó)內(nèi)外的260個(gè)小麥樣品材料進(jìn)行PCR

2、擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并對(duì)部分小麥品種進(jìn)行測(cè)序分析；隨后對(duì)260個(gè)品種中的230個(gè)樣品進(jìn)行小麥幾丁質(zhì)酶活性測(cè)定，并做了低溫對(duì)照試驗(yàn)，分析低溫對(duì)小麥幾丁質(zhì)酶活性的影響，最后展望了將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入到優(yōu)質(zhì)小麥以得到抗病體系的前景，主要結(jié)果如下：
　　 （1）在94份小麥材料中，Cht4的引物均擴(kuò)增出目的片段，Chi3和Cht2也大部分?jǐn)U增出目的條帶，而Chi1和Chi2的第一對(duì)引物擴(kuò)增出的只有37.2％，但第二對(duì)引物卻大部分都擴(kuò)

3、增出了目的片段。在260個(gè)小麥品種的擴(kuò)增結(jié)果中也大部分呈現(xiàn)這樣的趨勢(shì)，Cht4、Chi3和Cht2的擴(kuò)增率在85％以上，而Chi1和Chi2的擴(kuò)增率仍比較低。
　　 雖然每種基因的分布情況不同，但每個(gè)小麥品種中至少有一種幾丁質(zhì)酶基因在起作用。
　　 （2）在對(duì)8個(gè)小麥樣品進(jìn)行測(cè)序分析后發(fā)現(xiàn)，前面4個(gè)品種擴(kuò)增的片段所編碼的蛋白質(zhì)氨基酸序列與Cht4基因的同源性最高，屬于ClassⅣ幾丁質(zhì)酶基因；而后4個(gè)樣品測(cè)出的序列與Ch