小麥幾丁質(zhì)酶基因的檢測及酶活性研究.pdf

1、幾丁質(zhì)酶(chitinase，EC3．2．1.14)作為一種重要的病程相關蛋白，一直是植物抗菌基因工程的研究熱點之一。同時幾丁質(zhì)酶也是一種誘導酶，多種生物和非生物因素均可誘導幾丁質(zhì)酶基因的表達。本文從 NCBI 上已經(jīng)報道的小麥屬幾丁質(zhì)酶Chi1,Chi2,Chi3,Cht2,以及Cht4五個基因序列中分析比較并用Primer軟件分別設計了多對引物，對中國小麥微核心種質(zhì)中隨機選取的 94個小麥品種和國內(nèi)外的260個小麥樣品材料進行PCR

2、擴增和瓊脂糖凝膠電泳檢測，并對部分小麥品種進行測序分析；隨后對260個品種中的230個樣品進行小麥幾丁質(zhì)酶活性測定，并做了低溫對照試驗，分析低溫對小麥幾丁質(zhì)酶活性的影響，最后展望了將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入到優(yōu)質(zhì)小麥以得到抗病體系的前景，主要結果如下：
　　 （1）在94份小麥材料中，Cht4的引物均擴增出目的片段，Chi3和Cht2也大部分擴增出目的條帶，而Chi1和Chi2的第一對引物擴增出的只有37.2％，但第二對引物卻大部分都擴

3、增出了目的片段。在260個小麥品種的擴增結果中也大部分呈現(xiàn)這樣的趨勢，Cht4、Chi3和Cht2的擴增率在85％以上，而Chi1和Chi2的擴增率仍比較低。
　　 雖然每種基因的分布情況不同，但每個小麥品種中至少有一種幾丁質(zhì)酶基因在起作用。
　　 （2）在對8個小麥樣品進行測序分析后發(fā)現(xiàn)，前面4個品種擴增的片段所編碼的蛋白質(zhì)氨基酸序列與Cht4基因的同源性最高，屬于ClassⅣ幾丁質(zhì)酶基因；而后4個樣品測出的序列與Ch