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1、[目的] 為闡明survivin基因在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)與細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期阻滯的關(guān)系,我們擬通過(guò)采用RNAi技術(shù),通過(guò)靶向抑制survivin基因在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251中的表達(dá),觀察survivin基因沉默后U251細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的變化,探索survivin基因沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期的影響。 [結(jié)論] 本研究利用基于DNA的RNAi技術(shù),構(gòu)建出表達(dá)3條針對(duì)survivin基因的shRNA的重組
2、載體pGenesil-survivin,并成功導(dǎo)入到人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)siRNA誘導(dǎo)的RNAi明顯抑制了survivin基因在U251細(xì)胞的表達(dá);表達(dá)3個(gè)shRNA的重組載體pGenesil-survivin誘導(dǎo)的RNAi明顯強(qiáng)于表達(dá)單一shRNA的3個(gè)對(duì)照重組載體pG1、pG2、pG3所誘導(dǎo)的RNAi效力,提示在RNAi中采用表達(dá)針對(duì)靶基因多靶點(diǎn)的多條shRNA可以保證RNAi的高效性;研究顯示,siRNA介導(dǎo)的靶向沉默sur
3、vivin基因誘導(dǎo)了顯著的凋亡和G2/M期細(xì)胞周期阻滯,提示采用siRNA介導(dǎo)的RNAi靶向抑制survivin基因誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯,可能是膠質(zhì)瘤基因靶向治療的新的策略之一;進(jìn)一步的研究顯示,siRNA介導(dǎo)的靶向沉默survivin基因?qū)е耈251細(xì)胞發(fā)生凋亡的具體機(jī)制,與沉默survivin基因所導(dǎo)致的激活caspase-3切割其底物PARP引起細(xì)胞發(fā)生caspase依賴的凋亡,以及解除survivin蛋白對(duì)p53基
4、因活性的抑制,引起p53蛋白激活導(dǎo)致BCL-2家族中的凋亡促進(jìn)劑BAX分泌到線粒體膜釋放細(xì)胞色素C,從而激活凋亡有關(guān)。 本課題采用DNA載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù),通過(guò)靶向抑制survivin基因在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá),探索研究survivin基因沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期的影響,闡明了survivin基因表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤抗凋亡作用以及促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展的作用以及影響;同時(shí),研究survivin基因沉默導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的
5、細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,探索survivin基因在膠質(zhì)瘤中的凋亡相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。本項(xiàng)目著眼于膠質(zhì)瘤基因治療的全新分子靶點(diǎn)survivin,通過(guò)探索survivin基因沉默在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響研究,可為靶向survivin基因的膠質(zhì)瘤的基因治療提供充足的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù),并研究采用DNA載體介導(dǎo)的RNAi靶向沉默survivin基因在人膠質(zhì)瘤基因治療中的可行性,可能為RNAi介導(dǎo)的膠質(zhì)瘤基因治療提供全新的切入點(diǎn),對(duì)于促進(jìn)膠質(zhì)瘤
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