法尼醇X受體對L02細(xì)胞脂代謝的影響及機(jī)制.pdf

1、研究背景：脂肪肝已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國家和富裕地區(qū)慢性肝病的首要病因，在我國是僅次于乙肝病毒的第二位慢性肝病的原因，嚴(yán)重影響國民的健康水平及生活質(zhì)量，因此，有關(guān)脂肪肝的研究始終是一個(gè)熱點(diǎn)問題。法尼醇X受體(famesoid X receptor，F(xiàn)XR)、小異二聚體伴侶分子(smallheterodimer partner，SHP)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(sterol regulatoryelement-binding protein-1c

2、，SREBP-1c)屬于核受體或核轉(zhuǎn)錄因子，其中初級膽酸是FXR的天然激動(dòng)劑。FXR廣泛參與膽汁酸、糖及脂代謝，有可能成為治療脂肪肝和代謝性疾病的新的靶點(diǎn)；SHP在膽汁酸、糖、脂代謝中也具有重要作用，是脂肪肝發(fā)病中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子；SREBP-1c參與脂肪生成基因表達(dá)的調(diào)控；其中SHP是FXR的靶基因，SREBP-1c是SHP的靶基因。本實(shí)驗(yàn)采用油酸鈉誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞珠L02細(xì)胞建立脂肪變肝細(xì)胞模型、采用FXR激動(dòng)劑鵝去氧膽酸(cheno

3、deoxycholic acid，CDCA)鈉鹽建立干預(yù)模型，動(dòng)態(tài)觀察肝細(xì)胞脂變過程中FXR、SHP及SREBP-1c表達(dá)的變化，從肝細(xì)胞水平探討非酒精性脂肪肝脂質(zhì)沉積的可能機(jī)制，為尋找新的治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1、人肝細(xì)胞株L02用含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)、傳代。 2、MTT比色法篩選油酸鈉最佳作用濃度和作用時(shí)間。 3、實(shí)驗(yàn)設(shè)立對照組(記為C組)、模型組(加油酸鈉，記為F組)和

4、干預(yù)組(模型中加入鵝去氧膽酸鈉[1]，記為F1組)。 4、細(xì)胞內(nèi)TG含量檢測及油紅O染色鑒定L02肝細(xì)胞脂肪變變化；細(xì)胞培養(yǎng)上清ALT、AST含量鑒定細(xì)胞損傷變化；RT-PCR、Westem Blot檢測FXR、SHP、SREBP-1c受體mRNA及蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、L02肝細(xì)胞的脂肪變模型建立成功。隨著造模時(shí)間延長，肝細(xì)胞脂肪變程度加重。 1)油紅O染色：對照組僅見少量橘紅色脂滴；脂變和干預(yù)組

5、肝細(xì)胞內(nèi)各時(shí)間段都可見明顯脂滴，并有不同程度的融合，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長加重；但是，干預(yù)組的肝細(xì)胞內(nèi)脂滴較脂變組有所減少(P＜0.01)。 2)脂變組TG含量在24、48、72h各時(shí)間段均比對照組明顯增加(P＜0.01)；與脂變組相比，干預(yù)組TG含量在24、48、72h時(shí)相應(yīng)時(shí)間段均明顯降低(P＜0.01)。 2、各組細(xì)胞培養(yǎng)上清ALT、AST變化僅脂變組72小時(shí)AST、ALT水平略有升高，各組均無明顯差異(P＞0.05)。

6、 3、各組細(xì)胞內(nèi)FXR、SHP、SREBP-1 c mRNA及蛋白表達(dá)的變化。與對照組比較，脂變組各時(shí)間段的FXRmRNA及蛋白表達(dá)均有所下調(diào)，但這種差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)：而SHP、SREBP-1c mRNA及蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，并隨培養(yǎng)時(shí)間延長更明顯(P＜0.01)。在干預(yù)組，F(xiàn)XRmRNA及蛋白的表達(dá)較脂變組和對照組明顯升高，各時(shí)間點(diǎn)比較都具有顯著性差異(P＜0.01)；SHPmRNA及蛋白表達(dá)同步升高(P＜0.0

7、1)；SREBP-1c mRNA及蛋白雖然比對照組明顯上調(diào)(P＜0.01)，但是與脂變組相比顯著降低(P＜0.01)。 結(jié)論： 1、FXR表達(dá)下調(diào)與肝細(xì)胞脂肪沉積密切相關(guān)。 2、促進(jìn)FXR表達(dá)可能通過上調(diào)SHP的水平、抑制其靶基因SREBP-1c表達(dá)而改善L02細(xì)胞脂肪變性。 3、SHP在L02細(xì)胞脂肪變性中可能具有雙向調(diào)節(jié)作用。 4、FXR有可能成為治療脂肪肝的新靶點(diǎn)，F(xiàn)XR激動(dòng)劑鵝去氧膽酸鈉具