抗禽多殺性巴氏桿菌中藥組方的篩選及顆粒劑的研制.pdf

1、禽霍亂是由多殺性巴氏桿菌引起的一類禽類疾病，主要侵害家禽或野禽的接觸性疾病，又名禽巴氏桿菌病、禽出血性敗血癥。該病自然潛伏期一般2～9d，常呈現(xiàn)敗血性癥狀，發(fā)病率和死亡率很高，但也出現(xiàn)慢性或良性經(jīng)過。治療禽霍亂主要以西藥為主，雖然起到一定的治療效果，但西藥對家禽臟器有毒副作用，并且存在抗生索體內(nèi)殘留問題。而天然中藥既避免了對動物本身造成傷害，又不會造成藥物殘留。本實驗從20味中藥中篩選出幾味抗菌活性較強的中藥，并進行聯(lián)合抑菌實驗，篩選出

2、有相加和協(xié)同作用的中藥組方評價其急性毒性和抗感染效果，并研制顆粒劑。主要內(nèi)容結(jié)果如下:
　　1.20味中藥有效成分的提取及其對多殺性巴氏桿菌的體外抑菌活性研究:采用超聲波、乙醇回流、水浴加熱等方法對20味中藥的有效成分進行提取，將提取出來的有效成分對多殺性巴氏桿菌進行體外抑菌試驗，測出中藥有效成分對多殺性巴氏桿菌的最小抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC）和最小殺菌濃度(Minimal

3、 bactericidal concentration，MBC)，并通過棋盤法測定中藥有效成分對多殺性巴氏桿菌的聯(lián)合抑菌效果。結(jié)果顯示:艾葉、黃連、黃柏、秦皮、地榆、虎杖6種中藥提取物對多殺性巴氏桿菌的最低抑菌濃度值(MIC)為7.8mg/mL;赤芍、何首烏、茵陳、射干、甘草、蒲公英、白鮮皮7種中藥提取物的MIC值范圍在15.6～31.25mg/mL;金銀花、柴胡、板藍根、夏枯草、穿心蓮、知母、苦參7種中藥提取物的MIC值大于等于62.

4、5mg/mL。聯(lián)合抑菌試驗結(jié)果表明，黃連與艾葉、黃柏與艾葉、秦皮與艾葉、虎杖與艾葉的聯(lián)合抑菌指數(shù)(Fractiona Inhibitory Concentration Index，F(xiàn)ICI)(FICI)≤0.5，黃柏與虎杖、秦皮與虎杖、黃連與虎杖的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)≥2;秦皮與黃柏、地榆與黃柏的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)≥2。通過以上數(shù)據(jù)可以看出，黃連、黃柏、地榆、艾葉對多殺性巴氏桿菌均具有較好的體外抗菌活性;黃連與艾葉、黃柏與艾葉

5、、地榆與艾葉為相加或協(xié)同作用;地榆和黃柏為拮抗作用。最終篩選出黃連、黃柏和艾葉三味中藥進行組方。
　　2.組方顆粒劑最佳提取工藝的研究:對中藥組方篩選出來的三味中藥黃連、黃柏和艾葉采用正交試驗方法以浸膏得率、MIC和MBC作為評價指標及數(shù)據(jù)處理的方差分析選出三味中藥的最佳提取工藝。最佳提取工藝結(jié)果為:黃連70％乙醇，料液比1∶12，提取次數(shù)2次，每次1小時;黃柏70％乙醇，料液比1∶7，提取次數(shù)3次，每次80min;艾葉50％乙醇

6、，溫度70℃，提取時間2小時每次，料液比1∶30。
　　3.中藥組方提取物的急性毒性實驗及其對人工感染多殺性巴氏桿菌的療效觀察:根據(jù)獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則，對中藥組方提取物進行大鼠急性毒性試驗，大鼠無任何反應(yīng)無死亡，即LD50＞5000mg/kg。同時用小鼠進行多殺性巴氏桿菌造模，以中藥組方提取物對造模的小鼠進行高、中、低劑量組的抗感染實驗，小鼠按體重每10g給藥0.1ml。高劑量組存活率為80％;中劑量組存活率為80％;低劑量組存

7、活率為50％;對照組存活率20％。結(jié)論:中藥組方無毒;高、中劑量組對感染禽多殺性巴氏桿菌小鼠有一定抗感染活性，為中藥組方制劑的研發(fā)提供了理論依據(jù)。
　　4.組方顆粒劑的制備及其質(zhì)量控制:采用正交設(shè)計方法對組方顆粒劑的輔料:α—乳糖、可溶性淀粉和糊精按照不同比例進行篩選，通過重復(fù)性實驗和顆粒劑常規(guī)檢查建立其質(zhì)量評價標準，并用高壓液相色譜和紫外分光光度計對小檗堿含量進行測定。結(jié)果表明:中藥組方藥液與輔料最佳配比為1∶5，色譜條件乙腈-