禽多殺性巴氏桿菌質(zhì)粒pC48-1和pX73序列測(cè)定與分析.pdf

1、本試驗(yàn)從兩株禽源多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida，Pm)菌株C48-1和X73中提取和純化了內(nèi)源性質(zhì)粒，采用酶切克隆和引物步行測(cè)序策略測(cè)定了它們的基因全序列，其中pC48-1序列全長(zhǎng)為2621bp，pX73序列全長(zhǎng)為4220bp。 質(zhì)粒pC48-1和pX73的平均G+C含量分別為41.6％和42.8％，在整個(gè)序列中的分布都比較集中。pC48-1上存在6個(gè)正向重復(fù)序列和6個(gè)反向重復(fù)序列，pX73上存在6個(gè)正

2、向重復(fù)序列和12個(gè)反向重復(fù)序列，其長(zhǎng)度都超過(guò)10bp。在質(zhì)粒pC48-1的兩條鏈上共發(fā)現(xiàn)有6個(gè)開放閱讀框(ORF)，質(zhì)粒pX73的兩條鏈上共發(fā)現(xiàn)有19個(gè)開放閱讀框，大多數(shù)閱讀框之間有相互交迭的現(xiàn)象。質(zhì)粒pC48-1和pX73的開放閱讀框在密碼子的使用上沒有明顯的GC偏向性，但編碼區(qū)GC含量較質(zhì)粒整個(gè)序列的GC含量明顯增加，其編碼區(qū)GC含量分別為49.66％和46.96％。 pC48-1上存在Acc65Ⅰ、BamHⅠ、BclⅠ、H

3、indⅢ、KpnⅠ、NheⅠ、ScaⅠ、StuⅠ和XbaⅠ共9個(gè)單酶切位點(diǎn)，在質(zhì)粒pX73上存在AceⅢ、ClaⅠ、HincⅡ、M.HindⅡ、NheⅠ和StuⅠ共6個(gè)單酶切位點(diǎn)。 同源性分析發(fā)現(xiàn)，與質(zhì)粒pC48-1和pX73核苷酸序列同源性很高的序列分別有15和14個(gè)，且都與多殺性巴氏桿菌P1059菌株質(zhì)粒pLEM核苷酸序列高度同源。pC48-1的6個(gè)推測(cè)ORF中，有5個(gè)ORF編碼的氨基酸序列與其他蛋白質(zhì)有不同程度的同源性，其

4、中ORF2和ORF4編碼的氨基酸序列與多殺性巴氏桿菌質(zhì)粒pLEM的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白都有100％的同源性。pX73的19個(gè)推測(cè)ORF中，有13個(gè)ORF編碼的氨基酸序列與其它蛋白質(zhì)有不同程度的同源性，其中ORF7、ORF9、ORF13、ORF14、ORF15、ORF16、ORF17和ORF18編碼的氨基酸序列與豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌等的轉(zhuǎn)移蛋白A或B有90％以上的同源性。 因此，本研究工作通過(guò)兩株禽源Pm質(zhì)粒的基因全序列測(cè)定和分析，對(duì)將P