Sp1介導(dǎo)miR-375調(diào)控頭頸鱗癌生長和侵襲的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:核轉(zhuǎn)錄因子Sp1(Specificity protein1 transcription factor)在多種惡性腫瘤中存在表達(dá)及功能異常，參與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移等多項(xiàng)惡性生物學(xué)行為。課題組前期應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)構(gòu)建了頭頸鱗癌轉(zhuǎn)移相關(guān)差異蛋白表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)Sp1為其中重要的差異表達(dá)蛋白之一，但其在頭頸鱗癌轉(zhuǎn)移的研究報(bào)道甚少。本研究在體外實(shí)驗(yàn)中探討Sp1對頭頸鱗癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。另外，miRNAs是新發(fā)現(xiàn)的小分子非編碼RN

2、A，通過調(diào)控靶基因的表達(dá)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)研究另一方面探討miRNA對Sp1的調(diào)控作用，并進(jìn)一步分析miRNA可否靶向Sp1調(diào)控頭頸鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　方法:①使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染沉默頭頸鱗癌Tu686細(xì)胞中Sp1的表達(dá)，采用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力、transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力的改變;
　?、谕ㄟ^生物信息學(xué)軟件預(yù)測可靶向作用于Sp1的miRNAs。
　?、凼褂盟矔r(shí)轉(zhuǎn)染上調(diào)Tu686細(xì)胞中mi

3、R-375表達(dá)，運(yùn)用Western blot檢測Sp1蛋白表達(dá)水平，探討miR-375對Sp1表達(dá)的影響。
　?、苌险{(diào)Tu686細(xì)胞中miR-375表達(dá)，利用CCK-8法、transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測miR-375對Tu686細(xì)胞體外增殖、侵襲能力的影響。
　?、輒iR-375過表達(dá)Tu686細(xì)胞中再轉(zhuǎn)染Sp1 cDNA上調(diào)Sp1表達(dá)，運(yùn)用transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測其侵襲能力的改變。
　　結(jié)果:①沉默Tu

4、686細(xì)胞中Sp1表達(dá)，培養(yǎng)至48h及72h時(shí)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長速度較空白對照組及陰性對照組明顯下降(P＜0.05)。
　?、诔聊琓u686細(xì)胞中Sp1表達(dá)，48h后穿過transwell侵襲小室的空白對照組、陰性對照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)分別為114±20、126±7、65±15個(gè)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)較空白對照組及陰性對照組明顯減少(P＜0.05)。
　?、凵镄畔W(xué)預(yù)測及Western blot結(jié)果顯示miR-375靶向調(diào)控Sp1蛋白表

5、達(dá)。
　?、苌险{(diào)Tu686細(xì)胞中miR-375表達(dá)，培養(yǎng)至96h時(shí)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長速度較空白對照組及陰性對照組明顯下降(P＜0.05)。
　?、萆险{(diào)Tu686細(xì)胞中miR-375表達(dá)，48h后穿過transwell侵襲小室的空白對照組、陰性對照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)分別為165±21、151±18、96±19個(gè)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)較陰性對照組及空白對照組明顯減少(P＜0.05)。
　　⑥上調(diào)Tu686細(xì)胞中miR-375表達(dá)后再轉(zhuǎn)染