利血平增敏微生物法檢測(cè)三種氟喹諾酮類藥物殘留的研究.pdf

1、為探索微生物方法檢測(cè)氟喹諾酮類藥物殘留以及利血平增敏氟喹諾酮類藥物效果,最低檢測(cè)限降低的程度,本研究以金黃色葡萄球菌(CMCC(B)26003);短小芽孢桿(CMCC(B)63202);大腸桿菌(CMCC(B)44103);枯草芽孢桿菌(CMCC(B)63501);藤黃微球菌(CMCC(B)10240)五種菌為工作菌,建立了三種氟喹諾酮類藥物(恩諾沙星、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星)殘留的微生物法檢測(cè)研究,并用利血平增敏三種氟喹諾酮類藥物殘留的

2、研究。 1.三種氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)微生物學(xué)方法的建立。1.1最適菌層濃度和培養(yǎng)基pH值的選擇本研究通過測(cè)定不同菌層濃度和不同培養(yǎng)基pH值時(shí)三種抗生素對(duì)五種細(xì)菌的抑菌圈直徑及清晰度來確定最適菌層濃度和培養(yǎng)基pH值。結(jié)果表明：在本實(shí)驗(yàn)條件下,金黃色葡萄球菌的最適添加濃度為0.35％(5×106CFU/ml)、短小芽孢桿菌的最適添加濃度為0.4％(6×106CFU/ml)、大腸桿菌菌懸液的最適添加濃度為0.2％(12×105CFU

3、/ml)、枯草芽孢桿菌的最適添加濃度為0.2％(6×105CFU/ml),藤黃微球菌的最適添加濃度為0.8％(12×105CFU/ml)以及培養(yǎng)基最適pH值為6.5時(shí)可產(chǎn)生直徑最大、邊緣光滑、完整、清晰的抑菌圈。1.2三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中標(biāo)準(zhǔn)曲線本研究分別制備了三種藥物對(duì)五種菌在磷酸鹽緩沖液中的標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：各對(duì)照品于不同時(shí)間分別制備五組工作曲線,其斜率的變異系數(shù)均低于10％,表明其變異程度小、重復(fù)性好。對(duì)各對(duì)照品的

4、五組工作曲線各濃度抑菌圈直徑的校正值求平均值,并以此繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,抑菌圈直徑與藥物濃度的對(duì)數(shù)值呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r2均大于0.998。1.3三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中最低檢測(cè)限的測(cè)定本研究根據(jù)所添加藥物濃度可產(chǎn)生直徑大于10mm的、明顯的、清晰的抑菌圈為標(biāo)準(zhǔn)來確定最低檢測(cè)限。結(jié)果表明：同一藥物在不同菌種條件下,最低檢測(cè)限各有不同,恩諾沙星的最低檢測(cè)限分布在0.063-0.13μg/ml之間、環(huán)丙沙星的最低檢測(cè)限分布在0.25-2

5、.0μg/ml之間、左氧氟沙星的最低檢測(cè)限分布在0.5-1.0μg/ml之間。 2.利血平混合三種氟喹諾酮類藥物殘留增敏法的研究2.1利血平混合三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備結(jié)果表明：各混合液于不同時(shí)間分別制備五組工作曲線,其斜率的變異系數(shù)均低于10％,表明其變異程度小、重復(fù)性好。對(duì)各混合液的五組工作曲線各濃度抑菌圈直徑的校正值求平均值,并以此繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,抑菌圈直徑與藥物濃度的對(duì)數(shù)值呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r2均大

6、于0.998。 2.2利血平混合三種氟喹諾酮類藥物在磷酸鹽緩沖液中最低檢測(cè)限的測(cè)定結(jié)果表明：同一藥物在不同菌種條件下,最低檢測(cè)限各有不同,利血平混合恩諾沙星的最低檢測(cè)限分布在0.0078-0.016μg/ml之間、利血平混合環(huán)丙沙星的最低檢測(cè)限分布在0.010-0.063μg/ml之間、利血平混合左氧氟沙星的最低檢測(cè)限分布在0.016-0.13μg/ml之間。 本研究建立了利血平增敏氟喹諾酮類藥物殘留的微生物學(xué)檢測(cè)方法,RSD在