γ輻射損傷小鼠基因組表達(dá)譜分析及sirt1基因反義寡核苷酸的輻射增敏作用研究.pdf

1、本文運(yùn)用基因芯片技術(shù)和表達(dá)譜分析的方法在基因表達(dá)層次上對(duì)輻射損傷現(xiàn)象作出了新的描述和分析，發(fā)現(xiàn)了新的輻射相關(guān)基因，提出sirtl基因可能參與輻射損傷應(yīng)急調(diào)控，最后用反義寡核苷酸技術(shù)初步驗(yàn)證了sirtl反義寡核苷酸對(duì)A549細(xì)胞有輻射增敏作用，并對(duì)多種癌細(xì)胞系增殖有抑制作用。 第一部分為小鼠基因組芯片實(shí)驗(yàn)及表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)選取小鼠股骨骨髓為實(shí)驗(yàn)材料，用小鼠基因組芯片檢測(cè)了6．5Gyγ射線輻照前和輻照后6小時(shí)、l周和2周的基因表

2、達(dá)情況，通過(guò)芯片掃描和軟件分析得出每個(gè)基因在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)譜。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和倍數(shù)變化分析篩選出差異表達(dá)基因，并用互聯(lián)網(wǎng)上的生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異基因作了生物學(xué)注釋和通路分析。使用了層次聚類、K-Medoid聚類、交集分析和GeneOntology術(shù)語(yǔ)顯著性分析的方法篩選了部分輻射相關(guān)基因，配合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)提出了以sirtl基因?yàn)榇淼呐cY輻射損傷可能相關(guān)的基因，同時(shí)我們推測(cè)y射線輻射后sirtl表達(dá)下調(diào)會(huì)提高p53的活性。

3、 第二部分選取sirtl基因?yàn)檠芯繉?duì)象，首先以本室專利的方法預(yù)測(cè)了10個(gè)反義靶點(diǎn)，用RT-PCR和WesternBlot方法篩選了針對(duì)該基因的有效且特異的反義寡核苷酸序列；然后應(yīng)用MTS、流式細(xì)胞術(shù)和WesternBlot等方法，研究了該反義寡核苷酸序列在A549細(xì)胞系中的Y輻射增敏以及抗腫瘤領(lǐng)域內(nèi)的作用。。WesternBlot實(shí)驗(yàn)證明，sirtl基因在Y輻射后表達(dá)下調(diào)可能與p53的乙?；缴哂嘘P(guān)，提高的p53活性有利于其在輻射引