牛Ascl2、Tssc4和Osbpl5基因的印記狀態(tài)及Ascl2啟動子區(qū)DNA甲基化分析.pdf

1、分類號：Q三壘!密級：公玨單位代碼：!QQ墨魚學(xué)號：—2012—065牛Ascl2、Tssc4和傀助肛基因的印記狀態(tài)及Ascl2啟動子區(qū)DNA甲基化分析GenomicImprintingofAscl2、Tssc4、Osbpl5andDN。AGenomiclmDnntingS1ssc4ancl厶、methylationstatusofAscl2geneinpromoter學(xué)位申請人：王夢楠指導(dǎo)教師：李世杰教授學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)

2、學(xué)位類別：理學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一五年五月三十一日摘要基因組印記是由于等位基因表觀遺傳修飾的不對稱而導(dǎo)致印記基因在后代中的表達(dá)具有親本選擇性。印記基因在哺乳動物胚胎和胎盤的生長、出生后的生長發(fā)育以及疾病發(fā)生過程中起重要作用。許多印記基因的表達(dá)具有組織特異性和發(fā)育階段特異性。Cdknlc／Kcnqlotl印記區(qū)域與BwS綜合征(BeckwithWiedemannSyndrome)和癌癥有關(guān)，在該印記域中，至少包括8個

3、母源表達(dá)的蛋白編碼基因Ascl2，Tssc4，Cd81，Kcnql，Cdknlc，Slc22a18，Phlda2和偽助巧和1個父源表達(dá)的Kcnqlotl基因，Kcnqlotl轉(zhuǎn)錄的ncRNA調(diào)控父源等位基因沉默。本研究選取Cdknlc／Kcnqlotl印記區(qū)域內(nèi)Ascl2，Tssc4和傀印巧三個候選基因，首先應(yīng)用基于核苷酸多態(tài)的RTPCR產(chǎn)物直接測序法對Ascl2，Tssc4和仇助巧基因在牛7個組織(心、肝、脾、肺、腎、肌肉和脂肪)中的

4、表達(dá)進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ascl2基因和Tssc4基因在7個組織中均表達(dá)；Osbpl5基因在心、肝、肺、。腎和脂肪組織中檢測到表達(dá)。Ascl2基因在肺臟和肝臟組織中為單等位基因表達(dá)，而在心臟、脾、腎、肌肉和脂肪5個組織中為雙等位基因表達(dá)，印記表現(xiàn)出組織特異性。Tssc4和偽助西基因均呈現(xiàn)雙等位基因表達(dá)，表明Tssc4和份細(xì)巧在成年牛組織中非印跡。由于DNA甲基化是調(diào)控基因組印記的一種主要表觀遺傳修飾方式。為了揭示DNA甲基化在調(diào)控Asc

5、l2基因印記中的可能作用，我們進(jìn)一步應(yīng)用亞硫酸氫鹽測序法分析牛肺臟、肝臟和腎臟組織中Ascl2基因啟動子區(qū)的等位基因特異的甲基化狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Ascl2基因單等位基因表達(dá)的肺臟和肝臟中，兩條親本鏈的甲基化水平存在顯著差異(火005)，A鏈的甲基化水平(6108％、8822％)顯著高于G鏈(2411％、2561％)；而在Ascl2基因雙等位基因表達(dá)的腎臟組織中，A鏈(5377％)與G鏈(4944％)的平均甲基化水平差異不顯著(P005