藜蘆人參合用對HepG2細(xì)胞的增毒效應(yīng)及肝藥酶定量方法的建立.pdf

1、目的：在HepG2細(xì)胞水平上評價藜蘆與人參合用增毒模型，探討其增毒是否基于細(xì)胞色素P450的藥物相互作用引起。建立藥代酶濃度快速測定方法，用于規(guī)?；Y選“十八反”各藥物在體內(nèi)影響的靶藥代酶譜。
　　方法：通過細(xì)胞存活率、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、乳酸脫氫酶釋放率和細(xì)胞凋亡比例這些指標(biāo)考察藜蘆單用和藜蘆人參合用后對HepG2細(xì)胞的毒性;用不同濃度的人參水提液作用于HepG2細(xì)胞，采用qRT-PCR法檢測人參對細(xì)胞色素P450的mRNA表達(dá)的影

2、響。構(gòu)建包含41個肝藥酶的4個QconCAT質(zhì)粒，以QconCAT質(zhì)粒重標(biāo)培養(yǎng)表達(dá)酶切產(chǎn)生的標(biāo)記肽段為內(nèi)標(biāo)，對人肝微粒體中的肝藥酶進(jìn)行基于MRM的絕對豐度檢測。
　　結(jié)果：藜蘆與人參合用的IC50值(15.18±1.03)mg/mL與藜蘆單用的IC50值（21.46±1.10）mg/mL相比，對HepG2細(xì)胞增殖抑制作用更明顯;藜蘆人參低、中、高劑量配伍組比相同劑量藜蘆單用組對細(xì)胞膜的破壞更嚴(yán)重;流式細(xì)胞術(shù)檢測表明在中高劑量時合用

3、比單用更能引起晚凋和壞死。人參對CYP3A4、CYP1A1、CYP1A2、CYP2E1、CYP2B6 mRNA表達(dá)有調(diào)控作用。建立了肝藥酶豐度檢測的方法，GST肽段在復(fù)雜基質(zhì)中的回收率大于90％，重復(fù)性＜25％，QconCAT肽段的動態(tài)范圍達(dá)到2個數(shù)量級，線性大于0.98，符合方法學(xué)要求。用該方法檢測到的混合人肝微粒體中的肝藥酶共27個，豐度在2.83fmol/μg微粒體到161.66fmol/μg微粒體之間，技術(shù)重復(fù)性與生物學(xué)重復(fù)性C