針刺治療膠原性關(guān)節(jié)炎Cx43基因敲除鼠的免疫學(xué)機(jī)理研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：以牛Ⅱ型膠原(Bovine Collagen type Ⅱ，BC Ⅱ)皮內(nèi)免疫Cx43(connexin43，Cx43)基因敲除雜合型(Cx43+/-)和野生型(Cx43+/+)小鼠，建立Cx43基因敲除小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎(Collagen-induced Arthritis，CIA)模型。
　　 方法：用BC Ⅱ和完全弗氏佐劑(Complete Freund’s adjuvant，CFA)皮內(nèi)注射免

2、疫Cx43+/-和Cx43+/+雄性小鼠，觀察關(guān)節(jié)部位的腫脹并進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分；采用X線攝片、病理組織學(xué)等方法進(jìn)行小鼠病理學(xué)特征分析；用ELISA法檢測(cè)小鼠血清抗BC Ⅱ膠原抗體水平。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比，模型組小鼠踝關(guān)節(jié)與腳趾有明顯的腫脹，關(guān)節(jié)炎指數(shù)升高；X線攝片結(jié)果和病理組織學(xué)分析結(jié)果顯示，Cx43+/+和Cx43+/-CIA小鼠的關(guān)節(jié)均呈現(xiàn)典型的關(guān)節(jié)炎病變的特征；ELISA結(jié)果顯示：模型組小鼠血清中抗BC Ⅱ膠原抗

3、體水平較對(duì)照組明顯高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功建立了BC Ⅱ誘導(dǎo)的Cx43+/+小鼠和Cx43+/-小鼠CIA模型。BC Ⅱ誘導(dǎo)的Cx43基因敲除小鼠CIA模型的病理學(xué)特征與人類RA極為相似，為更好地進(jìn)行人類RA以及Cx43相關(guān)研究提供了一個(gè)良好的動(dòng)物模型。9周齡、Cx43+/+小鼠更易誘導(dǎo)出CIA模型。
　　 第二部分
　　 目的：觀察針刺對(duì)Cx43+/+和Cx43+/-CIA小鼠的療效和脾淋巴

4、細(xì)胞中Th細(xì)胞亞群分布，探討Cx43與針刺療效的相關(guān)性及其機(jī)制。
　　 方法：在初次免疫后第4w 開始對(duì)CIA小鼠連續(xù)針刺治療3w，觀察其關(guān)節(jié)炎指數(shù)，應(yīng)用三色流式細(xì)胞術(shù)對(duì)CIA組小鼠和對(duì)照組小鼠脾淋巴細(xì)胞中輔助T細(xì)胞(T cell helper，T h)亞群分布進(jìn)行檢測(cè)。
　　 結(jié)果：針刺治療后，Cx43+/+CIA小鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)下降較Cx43+/-CIA小鼠明顯(P<0.05)。針刺抑制Cx43+/+CIA小鼠Th1

5、細(xì)胞分泌，降低Th1/Th2比值，對(duì)Th2細(xì)胞的分泌無(wú)明顯影響；而針刺對(duì)Cx43+/-CIA小鼠Th1和Th2均無(wú)明顯影響。
　　 結(jié)論：針刺治療Cx43+/+CIA小鼠療效明顯優(yōu)于Cx43+/-CIA小鼠，提示針刺療效與Cx43基因相關(guān)，其療效可能是通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2使之接近動(dòng)態(tài)平衡而起作用的，針刺療效與這種調(diào)節(jié)作用成正相關(guān)。
　　 第三部分
　　 目的：觀察針刺對(duì)Cx43+/+和Cx43+/-CIA小鼠的

6、療效和外周血血清中IL-1β和TNF-α的水平的影響，探討Cx43與針刺療效的相關(guān)性及其機(jī)制。
　　 方法：在初次免疫后第4w 開始連續(xù)針刺治療3w，觀察關(guān)節(jié)炎指數(shù)，并以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各小鼠外周血血清中IL-1β和TNF-α的水平。
　　 結(jié)果：針刺治療后，Cx43+/+CIA小鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)下降較Cx43+/-CIA小鼠明顯(P<0.05)。針刺顯著降低了Cx43+/+CIA小鼠外周血血清IL-1β