心腦寧誘導增生血管平滑肌細胞凋亡的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的:探討以活血化瘀為主的中藥復方心腦寧體外誘導增生血管平滑肌細胞凋亡的作用及其分子機制.研究方法:1.血管平滑肌細胞增生模型的建立1.1血管平滑肌細胞原代培養(yǎng):貼塊法1.2血管平滑肌細胞傳代培養(yǎng):第四代1.3 IL-1刺激血管平滑肌細胞建立增生模型:2.中藥藥液的制備2.1中藥組成黃芪15g、枸杞10g、葛根10g、丹參10g、川芎5g、茯苓10g、半夏10g、、杜仲10g、水蛭10g、枳殼10g2.2制備方法分別用100μm、4

2、μm濾器,濾除中藥煎劑藥液中的粗顆粒沉淀和極細顆粒沉淀及細菌,配成實驗所需20g/100ml中藥液,再添加雙蒸水配成濃度為10g/100ml、5g/100ml的不同濃度藥液.3.中藥干預平滑肌細胞增生模型3.1干預方法:傳至第四代在培養(yǎng)液中加入中藥藥液3.2干預濃度:用20％、10％、5％三種濃度,3.3干預時間:分為48min、12h、24h三組,3.4同時設立空白對照組平行對照.4.凋亡細胞的檢測4.1瓊脂糖凝膠電泳法:細胞凋亡時其

3、染色質DNA在核小體連接處斷裂,形成180-200bp或其整倍數的寡核苷酸,在凝膠電泳上表現為梯狀條帶(DNA Ladder).4.2流式細胞儀觀察細胞凋亡時,G1峰前出現亞二倍體峰(subG<,1>).4.3透射電子顯微鏡觀察可見到凋亡細胞的不同形態(tài)學改變.研究成果:20％、10％、兩種濃度在三個時間點均誘導凋亡出現,5％濃度只在24h出現凋亡.研究結論:活血化瘀中藥復方心腦寧可以在體外誘導增生血管平滑肌細胞凋亡,這對中醫(yī)藥治療動脈粥

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