2-ME負(fù)性調(diào)控Akt1活性影響細(xì)胞周期和凋亡抑制鼻咽癌.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文Y7 6 6 2 8 22 ．M E 負(fù)性調(diào)控A k t l 活性影響細(xì)胞周期和凋亡抑制鼻咽癌2 M E l n h i b i t sN a s o p h a Ⅸn g e a l C a r c i n o m a b y C e ¨C y c l e A r 悖s ta n d A p o p t o s I sV i aN e g a t i V e I yR e g u I a 蚰n g t h

2、 e A c t i V I t y o f A k t l學(xué)位申請(qǐng)人：陶 祥導(dǎo)專(zhuān)師：楊惠玲教授業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)答辯主席： 鋤億答辯委員會(huì)成員：二o o 五年五月藝p 易I 彳7 、莎V孫移 半中山大學(xué)2 0 0 2 級(jí)碩士研究生學(xué)位論文 中文摘要本實(shí)驗(yàn)的第一部分是定性觀察2 M E 對(duì)C N E ．1 和c N E ．2 細(xì)胞的抑制作用。培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)2 ．5 ¨m o l ／L 和1 0p m o l ／L 的2 M E

3、 處理后在光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與D M s o 對(duì)照組( 2 ‰D M s O ，以下同) 相比，處理組細(xì)胞增殖變慢：低濃度和高濃度組的兩株細(xì)胞分別在約3 h 時(shí)出現(xiàn)貼壁細(xì)胞變圓，并隨時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)脫落。有部分細(xì)胞出現(xiàn)凋亡和變性壞死的形態(tài)學(xué)改變。進(jìn)而采用M T T 法和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)定量檢測(cè)2 M E 抑制N P C 細(xì)胞的效應(yīng)。在M T T 實(shí)驗(yàn)中，設(shè)立空白對(duì)照組( 加等量P B S 緩沖液) 、D M S O 對(duì)

4、照組、l O 岬o l ／L 、5 岬o l ／L 、2 ．5岬o l ／L 、1 ．2 5 岬o l ／L 、O ．6 2 5 岬0 1 幾五個(gè)藥物處理組，并設(shè)立藥物作用2 4 h ，4 8h ，7 2 h 三個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)。結(jié)果顯示：2 M E 對(duì)兩株細(xì)胞均有明顯的抑制作用( P1 0 ¨M ，5 ．4 7 ¨M和2 ．8 8 ¨M ；對(duì)c N E 一2 細(xì)胞的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的I C 5 0 分別為：5 ．4

5、 1 “M ，2 ．3 1 ¨M 和1 ．6 6 L L M 。而D M S O 對(duì)照與空白對(duì)照相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2 M E的抑瘤的作用存在時(shí)間一效應(yīng)和劑量一效應(yīng)關(guān)系。在軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)中，N P C 細(xì)胞經(jīng)不同濃度2 M E 處理并培養(yǎng)1 0 天，于低倍鏡( 4 ×物鏡) 下觀察，集落形成數(shù)在D M S O 對(duì)照組和空白對(duì)照之間無(wú)明顯差異。與對(duì)照組相比，低削量藥物處理組形成的集落數(shù)量相似，但集落的直

6、徑小，說(shuō)明N P C 細(xì)胞增殖受到抑制；高劑量時(shí)，形成的集落小而且數(shù)量也明顯減少，說(shuō)明2 M E 兼具了殺傷細(xì)胞的作用。2 M E 抑制C N E —l 和C N E ．2 增殖的最低有效劑量分別為O ．6 2 5 叫1 0 1 幾和O ．3 1 2 5岬o l ／L ( P < O ．叭) 。最后，在荷瘤裸鼠成瘤性抑制實(shí)驗(yàn)中，用藥物處理C N E 一2 后等量細(xì)胞接種裸鼠，在1 2 天的觀察期內(nèi)，發(fā)現(xiàn)5 ．6 岬o l 幾和2

7、．8 ¨m o l ／L 的2 M E與對(duì)照組相比，均有不同程度的抑瘤效果( P < o ．0 5 ) ，高低濃度處理組與對(duì)照相比腫瘤差異顯著( 尸< O ．0 1 ) 。且高濃度組裸鼠由于體質(zhì)較好，體重增加較對(duì)照組多。本實(shí)驗(yàn)的第二部分內(nèi)容是通過(guò)觀察2 M E 對(duì)C N E 一2 細(xì)胞周期和凋亡的影響，探討2 M E 的抑瘤機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為2 ．5u m 0 1 ／L ，1 ．2 5 “m o l ／L ，O ．6

8、2 5 “m o l ／L ，O ．31 2 5岫o l ／L 四個(gè)藥物處理組和D M s O 對(duì)照組，分別處理2 4h 和4 8 h 后，P I 染色后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著2 M E 劑量的增高以及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，S 、G 2 ／M 期的細(xì)胞比例增加，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察，表明2 M E 對(duì)細(xì)胞周期有抑制作用，其抑制的作用點(diǎn)為G 2 ／M 期的周期檢查點(diǎn)( G 2 n “p h a s ec h e c k p o i n t