遺傳和非遺傳因素對氯吡格雷酸(SR26334)血藥濃度的影響.pdf

1、研究背景：
　　氯吡格雷是一種口服的抑制二磷酸腺苷(ADP)受體的噻吩并吡啶類抗血小板藥物，廣泛應(yīng)用于包括急性冠脈綜合癥，經(jīng)皮冠狀動脈介入治療和中風(fēng)等的心血管疾病。由于氯吡格雷療效的顯著個體化差異，據(jù)統(tǒng)計，多達(dá)30％的患者未能達(dá)到預(yù)期藥效。氯吡格雷抵抗被視為主要原因，包括由于氯吡格雷代謝過程中涉及藥物代謝酶的基因多態(tài)性。同時，氯吡格雷抵抗也是診治高風(fēng)險心血管病人時的主要考量之一，尤其是接受急性冠脈綜合征治療的病患。
　　CY

2、P2C19的基因多態(tài)性對于氯吡格雷活性代謝物的生成起著至關(guān)重要的作用，并被認(rèn)為是氯吡格雷藥效學(xué)與藥動學(xué)個體化差異的主要原因之一。美國食品藥品監(jiān)督管理局也指出，在給予氯吡格雷治療前，最好先進(jìn)行CYP2C19的基因型分析。
　　除了基因多態(tài)性的因素外，非基因型因素也可能導(dǎo)致氯吡格雷療效的顯著個體化差異。所以，最好制定個體化給藥方案，尤其是對于可能會有影響氯吡格雷療效的基因型或非基因型因素的服藥患者。
　　由于近85％的原藥被酯酶

3、水解成氯吡格雷酸(SR26334)，并且活性代謝物不易測定，對于氯吡格雷的藥動學(xué)與藥效學(xué)特性主要通過氯吡格雷酸進(jìn)行研究。通過定量氯吡格雷酸血藥濃度，進(jìn)行氯吡格雷服藥患者的治療藥物監(jiān)測和表征氯吡格雷抗血小板效應(yīng)。
　　研究目的：
　　本研究的目的有:
　　1.建立快速、準(zhǔn)確、可靠的CYP2C19基因常見突變分型方法;
　　2.測定CYP2C19基因常見多態(tài)性位點(diǎn)*2，*3與*17在服用氯吡格雷患者中的突變頻率;

4、r>　　3.建立氯吡格雷酸在人血漿中的血藥濃度檢測方法;
　　4.研究遺傳和非遺傳因素對氯吡格雷酸血藥濃度的影響。
　　研究方法：
　　2011年11月至2012年6月期間，共150名無血緣關(guān)系的各民族病人（漢族，維吾爾族，蒙古族，烏孜別克族和錫伯族等）參加了本研究。所有病例均為服用氯吡格雷的患者（年齡在18歲以上）。所有受試者血樣采集于上海交通大學(xué)附屬新華醫(yī)院與新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院。
　　同時記錄患者的性別

5、、民族、年齡、體重、身高、是否高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒、高血脂、甲亢以及服用氯吡格雷劑量。
　　采集每位受試者3mL血樣（肝素抗凝），用于之后的基因分型工作與氯吡格雷酸血藥濃度測定，并準(zhǔn)確記錄服藥與采血時間。
　　同時，本研究建立了檢測CYP2C19*2，*3與*17位點(diǎn)基因型的引物特異性PCR方法，以此為基礎(chǔ)測定這三個位點(diǎn)在服用氯吡格雷患者中的基因突變頻率。對于研究人群DNA的提取方法，我們采用酚氯仿法提取DNA。根據(jù)C

6、YP2C19基因型，患者可分為3種類型:快代謝型（CYP2C19*1/*1）、中速代謝型(CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3)及慢代謝型(CYP2C19*2/*2、CYP2C19*3/*3、CYP2C19*2/*3)
　　參考文獻(xiàn)，在實驗室條件下建立 HPLC-UV方法用以分析氯吡格雷用藥后的氯吡格雷酸血藥濃度。采用硫酸鋅溶液蛋白沉淀法處理血樣，以乙腈∶水（磷酸調(diào)PH至3.17）(35∶65)為流動相，使用島津OD

7、S-SP(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流速調(diào)整為1mL/min。并進(jìn)行方法學(xué)確證，包括方法的專屬性、靈敏度和回收率、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度和精密度。
　　本研究擬采用逐步回歸分析法綜合分析患者的基因多態(tài)性、性別、民族、年齡、體重、身高、是否高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒、高血脂、甲亢以及服用氯吡格雷劑量等多種因素對氯吡格雷酸血藥濃度的影響。影響因素入選和剔除的統(tǒng)計學(xué)顯著性水平均取0.05。
　　研究結(jié)果：
　　CYP2

8、C19*2，*3與*17突變型等位基因在服用氯吡格雷患者中的頻率分別為29％，3％和0％。CYP2C19代謝類型分布顯示68位患者(45.33％)為快代謝，68位患者(45.33％)為中速代謝，14位患者(9.33％)為慢代謝。
　　采用HPLC-UV法測定人血漿樣品中的氯吡格雷酸的濃度。以噻氯吡啶為內(nèi)標(biāo)，經(jīng)200μL硫酸鋅沉淀蛋白，離心取上清，樣品檢測以乙腈∶水（磷酸調(diào)PH至3.17）(35∶65)為流動相，流速為1 mL/mi

9、n，以島津ODS-SP(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱進(jìn)行分離。氯吡格雷酸的線性范圍為100-10，000 ng/mL。本方法專屬性好，準(zhǔn)確，快速，符合方法學(xué)考證的要求。
　　經(jīng)逐步回歸分析，影響服用氯吡格雷患者氯吡格雷酸血藥濃度的顯著性因素由大到小依次為采血時間、吸煙、患者CYP2C19代謝類型、劑量?；颊叩男詣e、民族、年齡、體重、身高、是否高血壓、糖尿病、飲酒、高血脂和甲亢，由于與氯吡格雷酸血藥濃度的相關(guān)性不顯著(P＞

10、0.05)而被排除。最終回歸方程能夠解釋所研究患者群體中，氯吡格雷酸血藥濃度個體差異情況的63.1％，方程為ln(Y)=6.657-0.085(采血時間)-0.382(吸煙)+0.251(患者CYP2C19代謝類型)+0.002(劑量)。
　　結(jié)論：
　　我們首次研究了在中國服用氯吡格雷人群中 CYP2C19基因多態(tài)性與非遺傳因素對于氯吡格雷酸血藥濃度的影響程度。采血時間、是否吸煙、CYP2C19基因多態(tài)性以及氯吡格雷服用劑