Ursolic acid促K562-IM對伊馬替尼的敏感性的觀察及其機制初探.pdf

1、目的：本文旨在探討熊果酸（Ursolic acid；UA）增強慢性髓系白血?。╟hronic myelogenous leukemia;CML）耐伊馬替尼（Imatinib，IM）細胞株K562/IM對伊馬替尼的敏感性及其分子機制研究，為臨床上克服CML耐藥提供新的理論基礎。
　　方法：培養(yǎng)K562/IM細胞，分別用IM，UA，和兩藥聯用處理細胞。MTT檢測細胞增殖抑制率；流式細胞術檢測藥物誘導細胞凋亡的情況；RT-PCR及Wes

2、tern Blot檢測耐藥相關基因及Nrf-2/Keap-1/HO-1途徑mRNA及蛋白水平的變化。Fish檢測細胞中 Bcr-Abl融合基因的改變。在體內實驗中，構建 K562/IM裸鼠腫瘤模型，皮下注射腫瘤細胞一周后，分別給予各組小鼠生理鹽水，伊馬替尼，UA+IM，觀察并記錄裸鼠腫瘤生長大小及裸鼠中位生存時間。
　　結果：IM與UA聯合處理細胞24小時后，對K562/IM的增殖抑制率明顯低于K562細胞，聯合用藥增殖抑制率高于

3、單藥組；同樣，聯合用藥處理細胞24，48小時后，凋亡率顯著提高（p<0.05）。RT-PCR及Western Blot結果顯示UA處理細胞后，耐藥相關蛋白MDR1及GST-π的表達下調，BCR/ABL融合基因表達降低；不同濃度的UA處理K562/IM細胞后，Nrf-2，HO-1表達下調，Keap-1上調，并呈一定的濃度依賴性；用HO-1抑制劑Znpp IX聯合UA處理細胞，Nrf-2，HO-1表達下調，Keap-1上調，誘導劑Hemin

4、聯合UA聯合處理K562/IM細胞，Nrf-2，HO-1表達與單用Hemin相比表達無明顯升高，Keap-1表達較低（P<0.05），FISH檢測結果顯示：抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1途徑可伴隨BCR/ABL表達的降低。體內實驗結果顯示伊馬替尼聯合 UA作用后，K562/IM腫瘤的體積明顯小于單藥組，且中位生存期明顯長于單藥組。1
　　結論：研究表明UA在體外能夠通過抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1途徑增強K562