Ursolic acid促K562-IM對(duì)伊馬替尼的敏感性的觀察及其機(jī)制初探.pdf

1、目的：本文旨在探討熊果酸（Ursolic acid；UA）增強(qiáng)慢性髓系白血?。╟hronic myelogenous leukemia;CML）耐伊馬替尼（Imatinib，IM）細(xì)胞株K562/IM對(duì)伊馬替尼的敏感性及其分子機(jī)制研究，為臨床上克服CML耐藥提供新的理論基礎(chǔ)。
　　方法：培養(yǎng)K562/IM細(xì)胞，分別用IM，UA，和兩藥聯(lián)用處理細(xì)胞。MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的情況；RT-PCR及Wes

2、tern Blot檢測(cè)耐藥相關(guān)基因及Nrf-2/Keap-1/HO-1途徑mRNA及蛋白水平的變化。Fish檢測(cè)細(xì)胞中 Bcr-Abl融合基因的改變。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建 K562/IM裸鼠腫瘤模型，皮下注射腫瘤細(xì)胞一周后，分別給予各組小鼠生理鹽水，伊馬替尼，UA+IM，觀察并記錄裸鼠腫瘤生長(zhǎng)大小及裸鼠中位生存時(shí)間。
　　結(jié)果：IM與UA聯(lián)合處理細(xì)胞24小時(shí)后，對(duì)K562/IM的增殖抑制率明顯低于K562細(xì)胞，聯(lián)合用藥增殖抑制率高于

3、單藥組；同樣，聯(lián)合用藥處理細(xì)胞24，48小時(shí)后，凋亡率顯著提高（p<0.05）。RT-PCR及Western Blot結(jié)果顯示UA處理細(xì)胞后，耐藥相關(guān)蛋白MDR1及GST-π的表達(dá)下調(diào)，BCR/ABL融合基因表達(dá)降低；不同濃度的UA處理K562/IM細(xì)胞后，Nrf-2，HO-1表達(dá)下調(diào)，Keap-1上調(diào)，并呈一定的濃度依賴性；用HO-1抑制劑Znpp IX聯(lián)合UA處理細(xì)胞，Nrf-2，HO-1表達(dá)下調(diào)，Keap-1上調(diào)，誘導(dǎo)劑Hemin

4、聯(lián)合UA聯(lián)合處理K562/IM細(xì)胞，Nrf-2，HO-1表達(dá)與單用Hemin相比表達(dá)無(wú)明顯升高，Keap-1表達(dá)較低（P<0.05），F(xiàn)ISH檢測(cè)結(jié)果顯示：抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1途徑可伴隨BCR/ABL表達(dá)的降低。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示伊馬替尼聯(lián)合 UA作用后，K562/IM腫瘤的體積明顯小于單藥組，且中位生存期明顯長(zhǎng)于單藥組。1
　　結(jié)論：研究表明UA在體外能夠通過(guò)抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1途徑增強(qiáng)K562