乙肝表面抗原誘導的miRNAs抑制肝癌細胞中MICB的表達.pdf

1、肝癌(HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一，致死率高，嚴重危害人類健康。目前認為病毒、宿主和環(huán)境因素之間復(fù)雜的相互作用最終導致了HCC的發(fā)生。HBV感染引起HCC的主要病因，但其具體的發(fā)病機制并不明確。研究表明乙肝表面抗原大蛋白在慢性乙型肝炎惡性轉(zhuǎn)化過程中起重要作用[1-6]。主要組織相容性復(fù)合物Ⅰ類相關(guān)分子MICB是NKG2D的配體，在腫瘤細胞免疫逃逸過程中起重要作用。我們篩選出受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs，在過表達HBsAg的He

2、pG2細胞中有133個miRNAs是上調(diào)的，9個miRNAs是下調(diào)的。在這些受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs中，有一部分miRNAs可以通過靶向MICB的3'-UTR從而抑制MICB的表達。
　　目的:構(gòu)建穩(wěn)定表達HBsAg的細胞系，驗證受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs，并深入研究其在肝癌細胞免疫逃逸中作用機制。
　　方法:
　　(1)HBsAg過表達載體轉(zhuǎn)染HepG2、Huh7細胞，構(gòu)建穩(wěn)定細胞系，通過ELISA及wes

3、tern鑒定
　　(2)實時熒光定量PCR檢測穩(wěn)定表達HBsAg的肝癌細胞系miRNAs及MICBmRNA表達水平
　　(3)雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CHBsAg及miRNAs對MICB3'-UTR的作用
　　(4)流式細胞術(shù)檢測細胞表面MICB的蛋白表達水平
　　(5)NK細胞殺傷實驗檢測細胞的逃逸免疫清除能力
　　結(jié)果:
　　(1)成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達HBsAg的肝癌細胞系
　　(2)測序分析

4、篩選出的miRNAs中，可能會調(diào)節(jié)MICB基因表達的miRNAs在HBsAg過表達HepG2和Huh7肝癌細胞系中上調(diào)
　　(3)HBsAg誘導的miRNAs下調(diào)肝癌細胞中MICB的表達
　　(4)與對照相比，miRNAs抑制劑部分恢復(fù)HBsAg過表達細胞系中MICB的表達
　　(5)在肝癌細胞HepG2.2.15中，HBV通過誘導miRNAs的表達下調(diào)細胞中MICB水平。
　　結(jié)論:
　　(1)HBsAg