乙肝表面抗原誘導(dǎo)的miRNAs抑制肝癌細(xì)胞中MICB的表達(dá).pdf

1、肝癌(HCC)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，致死率高，嚴(yán)重危害人類健康。目前認(rèn)為病毒、宿主和環(huán)境因素之間復(fù)雜的相互作用最終導(dǎo)致了HCC的發(fā)生。HBV感染引起HCC的主要病因，但其具體的發(fā)病機(jī)制并不明確。研究表明乙肝表面抗原大蛋白在慢性乙型肝炎惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中起重要作用[1-6]。主要組織相容性復(fù)合物Ⅰ類相關(guān)分子MICB是NKG2D的配體，在腫瘤細(xì)胞免疫逃逸過(guò)程中起重要作用。我們篩選出受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs，在過(guò)表達(dá)HBsAg的He

2、pG2細(xì)胞中有133個(gè)miRNAs是上調(diào)的，9個(gè)miRNAs是下調(diào)的。在這些受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs中，有一部分miRNAs可以通過(guò)靶向MICB的3'-UTR從而抑制MICB的表達(dá)。
　　目的:構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)HBsAg的細(xì)胞系，驗(yàn)證受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs，并深入研究其在肝癌細(xì)胞免疫逃逸中作用機(jī)制。
　　方法:
　　(1)HBsAg過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HepG2、Huh7細(xì)胞，構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系，通過(guò)ELISA及wes

3、tern鑒定
　　(2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)穩(wěn)定表達(dá)HBsAg的肝癌細(xì)胞系miRNAs及MICBmRNA表達(dá)水平
　　(3)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證HBsAg及miRNAs對(duì)MICB3'-UTR的作用
　　(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面MICB的蛋白表達(dá)水平
　　(5)NK細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的逃逸免疫清除能力
　　結(jié)果:
　　(1)成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)HBsAg的肝癌細(xì)胞系
　　(2)測(cè)序分析

4、篩選出的miRNAs中，可能會(huì)調(diào)節(jié)MICB基因表達(dá)的miRNAs在HBsAg過(guò)表達(dá)HepG2和Huh7肝癌細(xì)胞系中上調(diào)
　　(3)HBsAg誘導(dǎo)的miRNAs下調(diào)肝癌細(xì)胞中MICB的表達(dá)
　　(4)與對(duì)照相比，miRNAs抑制劑部分恢復(fù)HBsAg過(guò)表達(dá)細(xì)胞系中MICB的表達(dá)
　　(5)在肝癌細(xì)胞HepG2.2.15中，HBV通過(guò)誘導(dǎo)miRNAs的表達(dá)下調(diào)細(xì)胞中MICB水平。
　　結(jié)論:
　　(1)HBsAg