乙肝表面抗原誘導(dǎo)的miRNAs抑制肝癌細(xì)胞中MICA的表達(dá).pdf

1、乙肝表面抗原(HBsAg)陽(yáng)性是肝癌的一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素，已有報(bào)道說(shuō)HBsAg的轉(zhuǎn)基因小鼠可自發(fā)肝癌。流行病學(xué)上，乙型肝炎病毒與肝癌的發(fā)生有著某種關(guān)聯(lián)是公認(rèn)的。近幾年來(lái)研究表明，miRNA與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，研究其與腫瘤的關(guān)系已經(jīng)成為熱點(diǎn)。在本研究中，主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)相關(guān)分子A(MICA)是NKG2D的配體，在腫瘤的免疫監(jiān)視中發(fā)揮著重要的作用。HBsAg的過(guò)表達(dá)可以使MICA的表達(dá)可以顯著地減少，這種抑制可以被部分修復(fù)，通過(guò)抑

2、制HBsAg誘導(dǎo)的miRNA的活動(dòng)。我們通過(guò)生物信息學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，在過(guò)表達(dá)HBsAg的HepG2細(xì)胞系中，133個(gè)miRNAs是上調(diào)的，9個(gè)miRNAs是下調(diào)的。此外，過(guò)表達(dá)乙肝表面抗原的肝癌細(xì)胞，表現(xiàn)出對(duì)自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解作用的敏感性降低。綜上所述，我們的數(shù)據(jù)表明，乙肝表面抗原是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)miRNA的表達(dá)來(lái)抑制MICA的表達(dá)，從而阻止NKG2D介導(dǎo)的清除肝癌細(xì)胞的活動(dòng)。
　　目的:構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)HBsAg的細(xì)胞系，驗(yàn)證

3、受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs，并深入研究其在肝癌形成中的作用機(jī)制。
　　方法:
　　(1)構(gòu)建過(guò)表達(dá)HBsAg的肝癌細(xì)胞系，通過(guò)ELISA及western鑒定。
　　(2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)HBsAg的肝癌細(xì)胞系中miRNAs及MICA mRNA表達(dá)水平。
　　(3)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證肝癌中miRNAs對(duì)MICA3'-UTR的作用。
　　(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面MICA的蛋白表達(dá)

4、水平。
　　(5) NK細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的免疫逃逸清除能力。
　　結(jié)果:
　　(1)成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)HBsAg的肝癌細(xì)胞系。
　　(2)測(cè)序分析篩選出的miRNAs中，可能會(huì)調(diào)節(jié)MICA基因表達(dá)的miRNAs在HBsAg過(guò)表達(dá)HepG2和Huh7肝癌細(xì)胞系中上調(diào)。
　　(3)HBsAg誘導(dǎo)的miRNAs下調(diào)肝癌細(xì)胞中MICA的表達(dá)。
　　(4)與對(duì)照相比，miRNAs抑制劑部分恢復(fù)HBsAg過(guò)表