乙型肝炎病毒X基因C1485T變異與肝細胞癌發(fā)生相關性研究.pdf

1、背景及目的： 肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是我國常見的惡性腫瘤之一，是一個發(fā)病率高、預后極差，嚴重危害人類身體健康的一個疾病，乙型和丙型肝炎病毒感染、環(huán)境因素以及遺傳易感性是肝癌發(fā)生的主要背景因素，其中，乙型肝炎病毒感染（Hepatitis B virus，HBV）是肝細胞癌發(fā)生發(fā)展的一個主要危險因素。在我國，HBV基因型主要為B型和C型，南方以B型為主，北方則以C型為主，山東地區(qū)也以C型

2、為主。目前的研究證明，HBV基因型C型比B型更容易引起活動性肝炎等肝臟疾病以及更容易引起肝細胞癌的發(fā)生。大量的研究表明，HBV X基因在HBV相關HCC的發(fā)生過程中發(fā)揮著極為關鍵的作用。HBx在乙型肝炎病毒整合入宿主細胞的過程中發(fā)揮著重要的作用，同時它又是一種具有反式激活功能的蛋白質，在調節(jié)基因轉錄、細胞信號轉到、控制癌基因以及抑癌基因的活性方面都具有重要的作用。流行病學調查表明，在人類肝細胞癌患者中經(jīng)常發(fā)生HBX基因的突變和缺失，增強

3、了其反式激活的功能，與肝細胞癌的發(fā)生密切相關。有報道發(fā)現(xiàn)HBx基因1485位胞嘧啶（C）變?yōu)樾叵汆奏ぃ═）在肝細胞癌患者中有較高的發(fā)生率，但目前的研究尚存在爭議，且在我國還沒有對此位點變異的相關研究和報道，故本研究我國C基因型乙肝病毒X基因1485位點的變異與肝細胞癌發(fā)生的關系以及乙肝相關性肝細胞癌發(fā)生的危險因素分析。 方法： 1、本研究收集了2007年9月到2008年9月在濟南市傳染病醫(yī)院住院的90例乙肝相關性肝細胞癌

4、患者以及90例慢乙肝、乙型肝炎肝硬化患者的血清和病例資料，其均為HBV基因型C型，檢測患者肝功、生化、血常規(guī)、HBV DNA，乙肝血清學標志等指標。應用乙肝病毒PCR擴增提取試劑盒按照說明流程從血清中提取HBVDNA。設計引物，擴增HBx基因，用PCR限制性片段多態(tài)性分析（Polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）技術檢測乙肝病

5、毒X基因1485位的變異情況，并選擇部分部分PCR擴增產(chǎn)物用PCR純化試劑盒提純，利用基因測序技術驗證其結果，以確保實驗的準確性。 2、采用SPSS13．0軟件錄入數(shù)據(jù)并進行統(tǒng)計學分析。計量資料采用t檢驗、Mann-Whitney檢驗；計數(shù)資料的分析采用Chi-square檢驗。用多因素Logistic回歸分析HBV相關肝細胞癌發(fā)生的危險因素。P<0．05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果： HBx基因第1485位點的變

6、異在90例肝細胞癌患者中發(fā)現(xiàn)有43例（48％），90例慢乙肝、乙肝肝硬化患者中發(fā)現(xiàn)有13例（14．4％），兩者差異有統(tǒng)計學意義（P<0．0001）。 經(jīng)過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)肝細胞癌患者合并肝硬化的比例高于慢肝患者，然而e抗原陽性率、血清白蛋白水平以及血小板計數(shù)均低于慢肝患者。多因素Logistic回歸分析顯示C1485T的改變、肝硬化的發(fā)生、e抗原陰性、年齡大于50歲以及AFP>400ng/ml是肝細胞癌發(fā)生的危險因素。 結論