致病疫霉線(xiàn)粒體單倍型PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、本研究在對(duì)4個(gè)致病疫霉線(xiàn)粒體單倍型（Ⅰa，Ⅰb，Ⅱa和Ⅲb）基因組序列多態(tài)性系統(tǒng)分析和對(duì)已有的3種線(xiàn)粒體單倍型檢測(cè)方法系統(tǒng)分析的基礎(chǔ)上，提出并建立了以PCR為基礎(chǔ)的致病疫霉線(xiàn)粒體單倍型快速檢測(cè)的新方法。本研究通過(guò)分析致病疫霉線(xiàn)粒體多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)了致病疫霉線(xiàn)粒體基因組中由大片段插入/缺失引起的2個(gè)高變區(qū)即HVRi和HVRii，并將其確定為線(xiàn)粒體單倍型檢測(cè)方法的目標(biāo)區(qū)域。第一個(gè)高變區(qū)HVRi由長(zhǎng)度為1885 bp的片段插入/缺失引起，該高變區(qū)

2、用于直接確定1990年Carter等人限制性?xún)?nèi)切酶酶切發(fā)現(xiàn)的用于區(qū)分由線(xiàn)粒體基因組長(zhǎng)度引起的不同線(xiàn)粒體類(lèi)型，即typeⅠ和typeⅡ。而第二個(gè)高變區(qū)HVRii不同數(shù)目(n=1，2，3)由36 bp重復(fù)單元構(gòu)成。該區(qū)域擴(kuò)增子長(zhǎng)度多態(tài)性應(yīng)用于線(xiàn)粒體新類(lèi)型的確定。綜合致病疫霉線(xiàn)粒體兩個(gè)高變區(qū)，將其單倍型劃分為6種類(lèi)型即Ⅰ R1，ⅠR2，ⅠR3，Ⅱ R1，ⅡR2和ⅡR3。本研究以23株致病疫霉菌株為例，用PCR方法檢測(cè)出5種線(xiàn)粒體單倍型，未發(fā)現(xiàn)

3、Ⅱ R1型。同時(shí)，在被測(cè)的23株代表性菌株中也發(fā)現(xiàn)了6個(gè)typeⅠ型菌株的錯(cuò)誤鑒定，它們是由于PCR-RFLP方法中P4產(chǎn)物第二個(gè)酶切位點(diǎn)識(shí)別序列中的堿基C突變?yōu)門(mén)而造成的。利用新建的PCR方法測(cè)定我國(guó)10個(gè)省、市、自治區(qū)共459株致病疫霉菌株的線(xiàn)粒體單倍型。其中，引起馬鈴薯晚疫病菌共計(jì)434株，共發(fā)現(xiàn)了5種線(xiàn)粒體單倍型，仍未發(fā)現(xiàn)Ⅱ R1;引起番茄晚疫病的共25株并且其中僅發(fā)現(xiàn)1種單倍型即ⅠR3。本研究基于PCR技術(shù)建立的病疫霉線(xiàn)粒體單