TMPyP4-PDT對人宮頸癌hela、siha細胞的殺傷效應(yīng)及對其C-myc、hTERC表達影響的研究.pdf

1、宮頸癌是女性常見腫瘤之一，其發(fā)病率及死亡率均居女性腫瘤的前位。目前手術(shù)、化療、放療仍是宮頸癌的傳統(tǒng)治療方法。光動力治療(photodynamictherapyPDT)是近年來快速發(fā)展起來的一種治療腫瘤的新的輔助手段，其主要原理是利用內(nèi)源性或外源性的光敏劑選擇性的吸收并潴留于病變組織中，然后在特定波長的激光照射下激活光敏劑，產(chǎn)生大量具有細胞毒性的活性氧(ROS)，從而達到使細胞或者組織死亡的目的。c-myc基因及人類染色體端粒RNA(hT

2、ERC)基因的過度表達在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用。大量研究均證實宮頸癌及其癌前病變中均存在c-myc及hTERC基因的擴增或過度表達?？纱龠M誘導(dǎo)并穩(wěn)定G-四聯(lián)體形成的四甲基吡啶卟啉(5，10，15，20-tetra-(N-methyl-4-pyridyl)porphyrin，TMPyP4)是一種新型的水溶性光敏劑，屬于人工合成的四價陽離子卟啉化合物，并有報道其可抑制端粒酶的活性[1]。本研究將探討端粒酶抑制劑四甲基吡啶卟啉(TMP

3、yP4)作為光敏劑介導(dǎo)的光動力治療對體外培養(yǎng)的人宮頸癌hela及siha細胞的殺傷效應(yīng)。并篩選出較為敏感的細胞。并觀察TMPyP4-PDT對篩選出細胞c-myc、hTERC基因表達的影響，初步探討其誘導(dǎo)凋亡的機制。
　　 第一部分TMPyP4-PDT對宮頸癌hela、siha細胞殺傷效應(yīng)的研究
　　 目的:探討TMPyP4-PDT對體外培養(yǎng)的宮頸癌hela、siha細胞的殺傷作用。
　　 方法:選擇人宮頸癌hel

4、a、siha細胞系作為實驗研究對象，分為正常對照組（不加光敏劑也不照光）;單純TMPyP4組（加光敏劑不照光）;單純光照組（不加光敏劑，照光）;實驗組（即加光敏劑又照光）。CCK-8法檢測TMPyP4-PDT對人宮頸癌細胞hela、siha的抑制作用;
　　 結(jié)果:正常對照組，單純TMPyP4組及單純光照組對hela、siha細胞的增殖均無明顯影響。TMPyP4-PDT組中，在同一藥物濃度下，隨著光照能量的加強，細胞的抑制率逐漸

5、增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。同一激光能量組，當(dāng)TMPyP4濃度在0-50μmol/L時，抑制率隨著藥物濃度的增加而呈上升趨勢，各濃度之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);當(dāng)TMPyP4濃度在50-100μmol/L時，抑制率差異不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。在相同激光劑量和TMPyP4濃度作用下，對hela細胞的抑制率高于對siha細胞的抑制率(P＜0.05)。在本實驗中，光敏劑TMPyP4濃度為50μmol/L，

6、激光劑量8J/cm2是TMPyP4-PDT體外殺傷hela、siha細胞較為理想的條件。在此條件下，hela、siha細胞的IC50分別是8.158、14.693μmol/L，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:TMPyP4-PDT對宮頸癌hela、siha細胞均有顯著殺傷作用，該作用存在光敏劑濃度及能量依賴現(xiàn)象，并有飽和現(xiàn)象;宮頸癌hela、siha細胞對TMPyP4-PDT的敏感性不同，宮頸癌hela細胞較敏感

7、。
　　 第二部分TMPyP4-PDT對宮頸癌hela細胞c-myc、hTERC表達的影響
　　 目的:探討TMPyP4-PDT對宮頸癌hela細胞的抑制作用及對c-myc、hTERC表達的影響。
　　 方法:選取激光劑量為4J/cm2。光鏡下觀察不同光敏劑濃度下細胞形態(tài)的變化;Annexin-V-FITC/PI雙染試劑盒檢測不同光敏劑濃度下細胞凋亡率;選取光敏劑濃度為20μmol/L,RT-PCR法測定宮頸癌細

8、胞hela正常對照組及TMPyP4-PDT組干預(yù)6、12、24、48、72小時后原癌基因c-myc、人類染色體端粒酶基因hTERC的變化。
　　 結(jié)果:光鏡下可觀察到隨著光敏劑濃度的增加，細胞逐步出現(xiàn)壞死和凋亡樣改變。Annexin-V-FITC/PI雙染試劑盒檢測細胞隨著隨著TMPyP4濃度的增加，細胞的凋亡率及壞死率均增加。RT-PCR法測定隨著培養(yǎng)時間的延長c-mycmRNA、hTERCmRNA的表達降低。