MMP-9-TIMP-1與慢性腎衰竭大鼠胸主動脈血管彈性功能的關系.pdf

1、目的:本研究通過構(gòu)建慢性腎衰竭大鼠模型，檢測其胸主動脈血管彈性指標脈搏波傳導速度(PWV)與血管壁基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制劑(TIMP-1)的表達情況，探討慢性腎衰竭中血管彈性的改變情況，PWV與胸主動脈血管壁MMP-9、TIMP-1的表達是否存在相關性及可能機制，為延緩慢性腎衰竭血管彈性的改變提供線索。
　　 方法:
　　 1.分組本論文采用完全隨機對照的研究方法，將于河北醫(yī)科大學動物實驗中心購買的36

2、只清潔級、健康、雄性、體質(zhì)量為170-230g的wistar大鼠，在河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院動物中心屏障環(huán)境適應性飼養(yǎng)1周后，隨機抽取18只行5/6腎切除術，構(gòu)建慢性腎衰竭大鼠模型（模型組），剩余18只行假手術（假手術組）。
　　 2.方法兩組大鼠于屏障環(huán)境飼養(yǎng)12周后通過多導電生理儀記錄動脈的壓力波形，測量大鼠胸主動脈-腹主動脈內(nèi)兩個導管尖端的距離(D)，計算胸主動脈-腹主動脈壓力的時間延遲(T)，計算PWV，PWV=D/T。通過

3、心臟取血留取血標本，處死大鼠后取其胸主動脈下段及殘余腎臟，部分于10％福爾馬林溶液中國定，余標本于-80℃冰箱保存，分離出的血清于-20℃冰箱保存。對大鼠腎臟組織進行HE染色，觀察腎臟結(jié)構(gòu)的病理改變，化驗血清鈣、磷、尿素氮、肌酐，以判斷慢性腎衰竭大鼠模型是否建立成功。對大鼠胸主動脈下段血管壁進行常規(guī)HE染色及免疫組化MMP-9、TIMP-1染色，檢測模型組和假手術組胸主動脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的表達情況。
　　 3.

4、統(tǒng)計分析用SPSS13.0軟件包進行數(shù)據(jù)處理，評價模型組和假手術組間彈性指標PWV及血清指標，計量資料采用均數(shù)±標準差（(x)±s），兩組間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗(independent-sample t test);模型組和假手術組間胸主動脈下段血管壁MMP-9和TIMP-1陽性表達采用Fisher確切概率法。對模型組內(nèi)PWV與胸主動脈血管壁MMP-9及TIMP-1的表達進行Spearman相關性分析。P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義

5、。
　　 結(jié)果:
　　 1.腎臟病理改變及血清學指標假手術組大鼠腎組織未見明顯病變，慢性腎衰竭大鼠模型腎臟HE染色病理改變:多數(shù)腎小球內(nèi)系膜細胞及系膜基質(zhì)明顯增生，部分腎小球呈缺血性皺縮，可見球性硬化;腎小管可見局灶性、節(jié)段性上皮細胞扁平、刷狀緣脫落，腎小管高度擴張及灶狀萎縮，腎間質(zhì)大量單核、巨噬細胞、淋巴細胞浸潤，可見纖維化形成。
　　 模型組的血清鈣、肌酐、尿素氮水平與假手術組比較有統(tǒng)計學差異，分別為1.96

6、±0.43 vs.2.27±0.26，P＜0.05;60.00±15.66 vs.40.06±5.38，P＜0.01;13.61±2.10 vs.10.19±2.47，P＜0.01;模型組的血清磷與假手術組比較無差別，1.94±0.39 vs.2.09±0.34，P＞0.05。
　　 2.脈搏波傳導速度的比較通過計算脈搏波傳導速度反應血管彈性功能，模型組的PWV高于假手術組，11.98±2.84 vs.4.66±0.47，P＜0

7、.01，有統(tǒng)計學差異，與假手術組相比，模型組大鼠的血管發(fā)生硬化，彈性明顯減低。
　　 3.免疫組織化學染色光鏡觀察應用免疫組織化學技術比較模型組和假手術組胸主動脈血管壁MMP-9及TIMP-1的表達。MMP-9、TIMP-1的陽性表達為胞漿呈棕黃色或棕褐色。假手術組胸主動脈血管壁上有少量MMP-9、TIMP-1的表達。模型組胸主動脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的陽性表達率分別為83.33％(15/18)和77.78％(14/

8、18)，而假手術組的陽性表達率分別為12.5％(2/16)和18.75％(3/16)。模型組胸主動脈壁上MMP-9、TIMP-1的陽性表達率明顯高于其在正常胸動脈壁上的表達。經(jīng)Fisher確切概率法統(tǒng)計分析，模型組與假手術組胸主動脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 4.模型組脈搏波傳導速度與胸主動脈血管壁MMP-9、TIMP-1表達的關系統(tǒng)計分析慢性腎衰竭大鼠模型血管彈性指標PWV與

9、胸主動脈血管壁MMP-9、TIMP-1表達的相關性。兩變量直線相關分析顯示MMP-9、TIMP-1與PWV呈正相關，分別為r=0.481，P＜0.05; r=0.493,P＜0.05，胸主動脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的表達增多與PWV增快有關聯(lián)，與血管彈性功能的減退有相關性。
　　 結(jié)論:
　　 1.從模型組大鼠腎臟組織的病理改變及模型組與假手術組間血肌酐和尿素氮升高的統(tǒng)計學差異，可以說明通過5/6腎切除術構(gòu)建慢