短期應(yīng)用辛伐他汀對大鼠缺血再灌注后心肌無復(fù)流的影響及潛在機(jī)制研究.pdf

1、目的： 他汀在改善缺血再灌注后心肌無復(fù)流(no-reflow，NR)方面作用尚缺乏足夠的證據(jù)，其內(nèi)在機(jī)制也有待進(jìn)一步研究。本研究采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈的方法建立大鼠缺血再灌注心肌 NR 模型，研究短期應(yīng)用大劑量辛伐他汀對大鼠心肌NR 及術(shù)后 28 天心功能的影響，觀察應(yīng)用辛伐他汀后內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthases，eNOS)，誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric

2、 oxide synthases，iNOS)活性、一氧化氮(nitric oxide，NO)水平以及核因子(nuclear factor,NF)-κB 活化程度的變化，并對反映中性粒細(xì)胞浸潤程度和活性的髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)的活性及反映心肌氧化損傷程度的丙二醛(malonaldehyde，MDA)的含量進(jìn)行分析，探討辛伐他汀對缺血再灌注后心肌NR 的影響及潛在機(jī)制。從而，為臨床改善無復(fù)流提示可能的治療靶點(diǎn)

3、。 方法： 雄性wistar大鼠69只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(18只)，對照組(25只)及辛伐他汀組(26只)。辛伐他汀組術(shù)前3天給予辛伐他汀20mg/kg/day灌胃，對照組及辛伐他汀組結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈，缺血90分鐘，再灌注120分鐘，建立大鼠心肌NR模型，假手術(shù)組僅開胸不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈。術(shù)后動(dòng)物一部分進(jìn)行急性實(shí)驗(yàn)觀察辛伐他汀對NR的影響及潛在機(jī)制，一部分進(jìn)行慢性實(shí)驗(yàn)觀察術(shù)后28天時(shí)心功能及左室重塑情況。 急性實(shí)驗(yàn)部分

4、： ①對照組及辛伐他汀組各6只進(jìn)行缺血范圍(area at risk/area of left ventricular，RA/INA)、NR 范圍(area ofno-reflow/area at risk，NA/RA)及梗死范圍(area of myocardial infarcton/area at risk，MIA/RA)評(píng)估； ②三組各6只用于心肌組織勻漿測定eNOS、iNOS 活性，NO含量、MPO活性及MDA

5、含量； ③三組各6只用于免疫組化測定心肌組織及微血管NF-κB p65活性。 慢性實(shí)驗(yàn)部分： ①各組6只術(shù)后28天測定血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)：心率(heart rate，HR)，收縮壓(systolic blood pressure，SBP)、舒張壓(diastolic blood pressure，DBP)、左室內(nèi)收縮壓(left ventricular systolic pressure，LVSP)，左室舒張末壓(l

6、eft ventricular end-diastolic pressure，LVEDP)，左室內(nèi)壓最大上升速率(LV+dp/dt)及左室內(nèi)壓最大下降速率(LV-dp/dt)。 ②測定后，取出心臟，制成石蠟切片，進(jìn)行天狼猩紅染色，測定梗死區(qū)左室游離壁厚度(left ventricular wall thickness in myocardial infarction area，MILVWT)，室間隔厚度(interventric

7、ular septum thickness，IVST)、膠原容積分?jǐn)?shù)(collagen volume fraction，CVF)及心肌細(xì)胞橫斷面積(cross sectional area，CSA)。 結(jié)果： 1．急性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (1)對照組與辛伐他汀組間缺血、NR及梗死范圍：兩組間缺血范圍無顯著性差異(44.22±7.97％vs 39.98±3.75％，P=NS)；而辛伐他汀組NR范圍顯著小于對照組(34.10±

8、7.05％vs 52.09±6.89％，P<0.01)，梗死范圍也小于對照組(78.80±7.60％vs 90.13±5.72％，P<0.05)。 (2)心肌組織tNOS、eNOS、iNOS活性及NO含量：三組間tNOS活性無顯著性差異；對照組及辛伐他汀組iNOS活性及NO含量均高于假手術(shù)組，對照組eNOS活性顯著低于假手術(shù)組，而辛伐他汀組eNOS活性與假手術(shù)組無顯著性差異；辛伐他汀組iNOS活性顯著低于對照組(5.02±1.6

9、4U/mg vs 9.19±2.89U/mg，P<0.01)，eNOS活性顯著高于對照組(7.08±1.74 U/mg vs 3.72±0.98 U/mg，P<0.01)，而NO含量低于對照組(586.21±126.97nmol/g vs 744.49±137.53 nmol/g，P<0.05)。 (3)心肌組織MPO活性及MDA含量：對照組及辛伐他汀組心肌組織MPO活性及MDA含量均高于假手術(shù)組；辛伐他汀組MPO活性及MDA含

10、量均低于對照組(257.72±93.43 U/g vs 384.10±40.68 U/g，72.10±18.56nmol/mg vs111.84±38.58 nmol/mg，均P<0.05)。 (4)心肌組織及微動(dòng)脈NF-κ13 p65免疫組化結(jié)果：三組間比較，室間隔心肌細(xì)胞NF-κB p65陽性指數(shù)無顯著性差異；對照組及辛伐他汀組左室游離壁梗死周邊心肌細(xì)胞及微動(dòng)脈NF-κB p65陽性指數(shù)均顯著高于假手術(shù)組；辛伐他汀組左室游離

11、壁梗死周邊心肌細(xì)胞及微動(dòng)脈 NF--κB p65 陽性指數(shù)低于對照組(21.59+10.51％vs 34.32+9.55％，27.27+13.19％vs 44.914-15.06％，均P<0.05)。 2.慢性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (1)術(shù)后28天血流動(dòng)力學(xué)結(jié)果：三組間比較，HR均無顯著性差異；對照組及辛伐他汀組 SBP、DBP、LVSP、LV+dp/dt及LV-dp/dt均低于假手術(shù)組，而LVEDP高于假手術(shù)組；辛伐他汀組LV+d

12、p/dt及LV-dp/dt均高于對照組(7871.134±851.53mmHg/s vs 6555.344±859.63 mmHg/s，6352.87±743.19 mmHg/s vs 5253.87±638.21mmHg/s，均P<0.05)，而LVEDP低于對照組(7.064±2.48 mmHg vs 9.654±2.17mmHg.P<0.05)，SBP、DBP及LVSP此兩組間無顯著性差異。 (2)天狼猩紅染色結(jié)果：三組間

13、比較，IVST、非梗死區(qū)CVF(CVF innon-myocardial infarction area，NMICVF)無顯著性差異；對照組及辛伐他汀組MILVWT均顯著小于假手術(shù)組，梗死區(qū)CVF(CVF in myocardial infarction area，MICVF)及CSA均大于假手術(shù)組；辛伐他汀組MILVWT大于對照組(1.79±0.32mm vs 1.364±0.28mm，P<005)，MICVF及CSA 均顯著小于對照

14、組(61.11±5.74％vs 80.64±9.07％，796.48±102.70μm<'2> vs 1056.73±130.54μm<'2>，均P<0.01)。 初步結(jié)論： ①結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈致缺血90分鐘，再灌注120分鐘可以發(fā)生心肌組織灌注缺損，出現(xiàn)心肌NR。 ②辛伐他汀可以改善缺血再灌注后心肌組織灌注，減輕NR。 ③辛伐他汀可能通過改善內(nèi)皮功能，抑制炎癥反應(yīng)，進(jìn)而抑制中性粒細(xì)胞的激活浸潤，減少活性氧