辛伐他汀對(duì)血脂正常大鼠缺血再灌注后心肌損傷的預(yù)保護(hù)及作用機(jī)制.pdf

1、目的：本課題主要研究辛伐他汀在缺血再灌注心肌損傷中的抗炎作用。缺血再灌注損傷心肌在許多危重疾病狀態(tài)是不可避免的。目前有研究表明缺血再灌注的心肌損傷部分與中性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞的相互作用有關(guān)，同時(shí)細(xì)胞因子起著調(diào)節(jié)和修飾作用。他汀類藥物，3-羥基-3甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)抑制劑，不僅能降低血脂水平，而且有獨(dú)立于降脂作用的其它心肌作用。本課題通過(guò)觀察不同條件下不同時(shí)段大鼠心肌缺血再灌注后血清腫瘤壞死因子(Tumorne

2、crosisfactor-alphaTNF-a)和組織中白細(xì)胞介素-4(Interlukin-4IL-4)、髓過(guò)氧化物酶(MyeloperoxidaseMPO)、丙二醛(MalondialdehydeMDA)的動(dòng)態(tài)變化，研究辛伐他汀對(duì)在體血脂正常大鼠缺血再灌注損傷心肌的預(yù)保護(hù)作用，探討其減少心肌損害的可能機(jī)制，為辛伐他汀更廣泛的應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。 材料和方法：雄性Wistar大鼠72只，隨機(jī)分為四組：(1)假手術(shù)組(Sha

3、m，n=9，生理鹽水2ml/d灌胃5w)：只于左冠狀動(dòng)前降支處進(jìn)針而不結(jié)扎；(2)缺血再灌注組(IR，n=21，生理鹽水2ml/d灌胃5w)：結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支造成心肌缺血30分鐘后再開(kāi)放；(3)辛伐他汀預(yù)處理組(Sim，n=21，5mg/kg/d，灌胃5w)：手術(shù)操作同IR組；(4)缺血預(yù)處理組(IPC，n=21，生理鹽水2ml/d灌胃5w)：結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支，缺血5分鐘，再灌注5分鐘，反復(fù)2次后，缺血5分鐘，再灌注10

4、分鐘，最后行缺血30分鐘后開(kāi)放。每組又分缺血30分鐘、再灌注30分鐘、再灌注90分鐘三個(gè)時(shí)段。根據(jù)入選標(biāo)準(zhǔn)和退出標(biāo)準(zhǔn)確定造模成功后，分別測(cè)定血清中TNF-a,心肌組織中MPO、MDA、IL-4，行缺血區(qū)心肌HE染色，肉眼觀察心肌細(xì)胞變性及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SAS版軟件包做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果：1血脂的變化四組Wistar大鼠的血脂水平無(wú)顯著差異(1.75±0.55vs1.98±0.1

5、8vs1.89±0.23vs1.74±0.30mmo1/1，P＞0.05)。 2心肌勻漿MDA含量在缺血再灌注中的變化同一組再灌注心肌組織MDA含量均隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)而遞增。IR組、Sim組、IPC組中，三時(shí)間段MDA含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，分別為(1.74±0.11)vs(2.07±0.12)vs(2.88±0.20)nmol/mgprot，(1.55±0.24)vs(1.65±O.15)vs(2.28±0.24

6、)nmo1/mgprot，(1.40±0.16)vs(1.62±O.15)vs(2.31±O.29)nmo1/mgprot。同一時(shí)間段，IR組MDA含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，其中再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時(shí)，Sim組和IPC組MDA含量均高于Sham組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但I(xiàn)PC組和Sim組心肌組織中MDA含量無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

7、 3心肌勻漿MPO含量在缺血再灌注中的變化同一組再灌注心肌組織中MPO含量隨時(shí)間變化增加。IR組、IPC組、Sim組中MDA含量在三時(shí)間段變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，分別為(4.47±0.27)vs(5.40±0.29)vs(6.57±0.26)單位/克濕片，(3.75±0.43)vs(4.87±0.30)vs(5.74±0.30)單位/克濕片，(3.75±0.48)vs(4.48±0.34)vs(5.64±O.33)單位/

8、克濕片。四組比較：同一時(shí)間段，IR組MPO含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，其中再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時(shí)，Sim組和IPC組MPO含量均高于Sham組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但I(xiàn)PC組和Sim組MPO含量無(wú)顯著差異。 4心肌組織中IL-4在缺血再灌注中的變化同一組再灌注心肌組織中IL-4含量隨時(shí)間變化增加。IR組、Sim組、IPC組中IL-

9、4含量在再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，分別為(54.83±5.78)vs(100.72±10.35)pg/gprot，(56.71±10.9)vs(85.28±6.98)pg/gprot，(57.88±11.16)vs(74.02±12.01)pg/gprot。四組比較：同一時(shí)間段，IR組IL-4含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，以再灌注90分鐘時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。再灌注90分鐘時(shí)

10、，Sim組和IPC組IL-4含量均高于Sham組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但I(xiàn)PC組和Sim組IL-4含量無(wú)顯著差異。 5血清TNF-a在缺血再灌注中的變化同一組中再灌注心肌組織中TNF-a含量隨時(shí)間變化增加。IR組、Sim組、IPC組中TNF-a含量在三時(shí)間段變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，分別為(1.25±0.07)vs(L43±0.11)Vs(1.93±0.20)ng/ml，(1.23±0.02)Vs(1.36±0

11、.09)vs(1.68±0.13)ng/ml，(L24±0.04)vs(1.38±O.07)vs(L67±0.04)ng/ml。均以再灌注30分鐘和再灌注90分鐘兩時(shí)間段間差異顯著(P＜0.01)。四組比較：同一時(shí)間段，IR組TNF-a含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，其中再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時(shí)，Sim組和IPC組TNF-a含量均高于Sham組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)

12、意義(P＜0.05)，但I(xiàn)PC組和Sim組TNF-a含量無(wú)顯著差異。 6病理H-E染色結(jié)果缺血前正常心肌組織中心肌纖維排列整齊，細(xì)胞邊界完整，心肌橫紋清晰。I/R組中，缺血30分鐘，缺血區(qū)心肌中出現(xiàn)少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，大血管中可見(jiàn)少量中性粒細(xì)胞附壁，缺血區(qū)心肌細(xì)胞腫脹變性，未見(jiàn)明顯壞死灶。再灌注90分鐘，再灌注心肌細(xì)胞中可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，累及心肌層和心外膜，大小血管內(nèi)外均可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞附壁聚集。大量心肌細(xì)胞水腫、變性、

13、壞死，橫紋不清楚。藥物預(yù)處理組和IPC組，再灌注90分鐘，心肌細(xì)胞中可見(jiàn)局部中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，累及心肌層和心外膜，大小血管內(nèi)外均可見(jiàn)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞附壁聚集，橫紋不清楚，但程度較I/R組減輕。 結(jié)論：1本研究通過(guò)觀察IR、Sim、IPC三組大鼠缺血30分鐘、再灌注30分鐘、再灌注90分鐘MDA、MPO、TNF-a、IL-4的含量或活性的變化，發(fā)現(xiàn)缺血再灌注后心肌損傷程度與上述因子的表達(dá)水平有關(guān)，呈正相關(guān)。 2

14、Sim組和IPC組中MDA、MPO、TNF-a、IL-4水平在各時(shí)段均低于IR組，而Sim組和IPC組中差別不顯著，表明辛伐他汀藥物治療和缺血預(yù)處理能抑制TNF-a的釋放，減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和氧自由基產(chǎn)生，減輕缺血再灌心肌損傷，這可能與辛伐他汀仰制NF-kB活性，降低黏附分子表達(dá)，改善內(nèi)皮功能，促進(jìn)NO合成和IL-4表達(dá)有關(guān)。 3辛伐他汀和缺血預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌損傷的干預(yù)效果短時(shí)間內(nèi)(再灌注90分鐘)無(wú)明顯差別，提示辛伐他汀