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文檔簡介
1、目的：通過電轉化法介導轉化生長因子β1(TGF-β1)和EGFP基因轉染兔骨髓間充質干細胞(BMSCs)，觀察Ⅱ型膠原蛋白表達情況。
方法：取3只1周齡清潔級健康新西蘭大白兔，麻醉后處死，無菌條件下取出脛骨及股骨，暴露髓腔沖出骨髓，應用全骨髓細胞貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)出兔的BMSCs;流式細胞儀法檢測細胞表型;將培養(yǎng)獲得的BMSCs分3組:TGF-β1+EGFP共轉染組，EGFP單獨轉染組，空白對照組。利用電轉化技術將TGF-β
2、1和EGFP對BMSCs進行轉染，熒光顯微鏡觀察轉染效果，繼續(xù)培養(yǎng)至14d[1]，應用免疫組化法和western blot法分別檢測Ⅱ型膠原表達情況。
結果：成功分離并培養(yǎng)出BMSCs，經(jīng)流式細胞儀鑒定其細胞表型CD90和CD44表達為陽性，CD31和CD45表達為陰性;成功轉染TGF-β1至BMSCs后;通過免疫組化檢測TGF-β1組細胞內(0.4870±0.0181)Ⅱ型膠原有較強的表達，與EGFP組(0.0858±0.0
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